PCR扩增子长度:50-180bp 引物长度:17-25bp GC含量:45-55% Tm:58-68℃,引物对间差异不大于2℃ 碱基随机分布,尽量均匀。3′端要避开AT,GC rich区域,避开T/C或A/G连续结构(2-3个)。引物自身和引物间不能存在互补。引物3′末端为G或C 避免DNA污染,跨外显子接头区 至少设计2-3对引物,预实验筛选最佳引...
(6)PCR扩增产物长度:引物的产物大小不要太大,一般在80-250bp之间都可;80～150 bp最为合适(可以延长至300 bp)。 (7)引物的退火温度要高,一般要在60度以上; 要特别注意避免引物二聚体和非特异性扩增的存在。 而且引物设计时应该考虑到引物要有不受基因组DNA污染影响的能力,即引物应该跨外显子,最好是引物能...
首先说明qPCR扩增目的条带长在100-150 bp左右，所以建议marker用50 bp的Ladder，2000 bp的都聚在最下面...
PCR产物太长:一般采用80-150bp的产物长度。 3.标准曲线线性关系不佳 加样存在误差:使得标准品不呈梯度。 标准品出现降解:应避免标准品反复冻融,或重新制备并稀释标准品。 引物或探针不佳:重新设计更好的引物和探针。 模板中存在抑制物,或模板浓度过高 4.负对照有信号 引物设计不够优化:应避免引物二聚体和发夹...
1、首先打开NCBI，选择“Nucleotide”，并在搜索框输入基因名。一般用目标基因的突变体1去设计引物，也就是要选择目标基因的“transcriptvariant1,mRNA”,没有1就用2、3，以此类推。因为是Q-PCR，所以要去掉内含子，因此用mRNA。2、从上一个页面点击FASTA，可以看到mRNA的序列。3、搜索“NCBIBLAST”并...
Q-PCR引物特异性检测方法以96孔板为例 1.将模板DNA,分别稀释50倍,250倍,1250倍,6250倍(5倍稀释) 2.将Q-PCR引物与SYBR GreenI混匀(引物 0.5ul/孔,SYBR5ul/孔) 3.将稀释的模板和引物分别点入96孔板,进行Q-PCR实验 4.在setup里将样品从unknow调成standard 设置平行孔和稀释梯度 5.分析图像结果 (1)看...
Q-PCR引物特异性检测方法以96孔板为例 1.将模板DNA,分别稀释50倍,250倍,1250倍,6250倍(5倍稀释) 2.将Q-PCR引物与SYBR GreenI混匀(引物 0.5ul/孔,SYBR5ul/孔) 3.将稀释的模板和引物分别点入96孔板,进行Q-PCR实验 4.在setup里将样品从unknow调成standard 设置平行孔和稀释梯度 5.分析图像结果 (1)看...
miRNA Q-PCR 检测用引物设计 百奥迈科生物技术有限公司B 电话：地址：江苏省南通市经济与技术开发区常兴路 miRNA Q-PCR Detection Primer Set z 概述：microRNA(miRNA)是一类有大约22 个核苷酸组成的非编码小分子RNA ，其广泛存在于真核生物中。miRNA 在个体发育的不同时期及不同组织中有不同的表达模式，...
1 首先打开NCBI，选择“Nucleotide”，并在搜索框输入基因名。一般用目标基因的突变体1去设计引物，也就是要选择目标基因的“transcript variant 1, mRNA ”,没有1就用2、3，以此类推。因为是Q-PCR，所以要去掉内含子，因此用mRNA。2 从上一个页面点击FASTA，可以看到mRNA的序列。3 搜索“NCBI BLAST”并点击...