以小麦开花后10天的小麦种子为实验对象提取蛋白，以CCRM1-1为探针并使用生物素标签进行标记，进行DNApull-down，捕获的蛋白进行SDS-PAGE分离，酶解后利用LC-MS对结合探针的蛋白进行鉴定。三、研究结果 通过LC-MS共鉴定出385个蛋白，其中包含118个可能与CCRM1-1结合的转录效应子，118个转录效应子中包含31个转录因子。
设计特异性DNA探针,探针经过脱硫生物素标记,跟偶联在磁珠上的链霉亲和素结合;细胞核提取物与磁珠-DNA探针孵育,作用蛋白质分子可以和DNA探针特异性结合;纯化出与靶DNA片段结合的蛋白复合体,经过洗涤可以将非特异性结合蛋白质去除;最后,经洗脱液洗脱,得到目的DNA探针-蛋白质复合物,再经过Western Blot或质谱(MS)鉴定...
3双荧光素酶实验确定了CLC-3启动子的活性区域 4DNA pull down MS实验找到了CLC-3启动子活性区域的潜在结合蛋白XRCC5 5体内DNA探针检测和ChIP-PCR实验都确定了XRCC5蛋白可以结台CLC-3启动子 6免疫组化实验表明XRCC5和CLC-3的表达呈正相关,且两者高表达指示患者预后不良 7基因表达/敲除和细胞功能实验结果显示CLC-...
Pull-down技术与Co-IP非常相似,只不过后者是用抗体交联磁珠或agarose ,pull-down是用固相化的、已标记的饵蛋白或标签蛋白(生物素-、PolyHis-或GST-),从细胞裂解液中钓出与之相互作用的蛋白(对混合液中的所有蛋白)。通过Pull-down技术可以确定已知的蛋白与钓出蛋白或已纯化的相关蛋白间的相互作用关系,从体外转录...
A：DNA pull down-MS是体外研究蛋白-DNA是否有直接互作的经典技术，是将探针结合在凝胶/磁珠上，钓取与DNA探针有互作的蛋白；就技术而言,没有明显的缺陷;后续质谱能鉴定到多少蛋白取决于蛋白-DNA结合的强弱、蛋白的丰度等。Q7： 做DNA pulldown 用DNA单链好还是双链好？A：常规的是用DNA双链作为探针。Q8： ...
日前,南方医科大学南方医院在知名杂志《Cell Death Dis》发表高分文章,辉骏生物为合作客户提供RNA pull down MS,RNA免疫沉淀(RIP),染色质免疫沉淀(CHIP),LC-MS/MS质谱检测等实验技术支持.辉骏自有质谱实验平台,专业团队为客户及时沟通了解RNA pull down实验内容,价格低
为了找到FOXD3-AS1的靶蛋白,研究者进行了RNA pull-down(图3C)和质谱(MS)分析鉴定(图3D),鉴定到潜在结合蛋白YBX1,RNA pulldown WB技术实验验证了FOXD3-AS1可以与YBX1结合(图E)。RNA免疫沉淀(RIP)qPCR实验操作再次确认了YBX1是FOXD3-AS1的靶蛋白(图F)。为了探讨FOXD3-AS1和YBX1的表达关系,在体外NPC细胞...
互作蛋白鉴定、小分子药物靶标鉴定、RNA/DNA结合蛋白鉴定、受体鉴定是生命科学研究中非常广泛的需求。Pull-down+MS是我们熟悉的实验方法,但其结果往往不及预期。“工欲善其事,必先利其器”,好的工具能极大助力我们取得好的结果。 去年,上海交通大学...
样品处理—GST/His-诱饵蛋白原核表达载体构建—GST融合蛋白表达—GST融合蛋白纯化—Pull-down捕获猎物蛋白—SDS-PAGE电泳—Western blot或LC-MS/MS 二、DNA Pull-down DNA pull-down是一种新颖的体外研究DNA与蛋白互作的实验技术。该技术以研究的DNA序列为探针,寻找与该序列结合的蛋白质,最常见的应用是寻找某个或者...
DNA pull down实验技术原理-DNA pulldown详细实验流程 DNA pull down-MS 是研究体外 DNA-蛋白质相互作用的有力工具。 生物素标记的 DNA 片段与链霉亲和素磁珠结合，然后与细胞核蛋白一起孵育。 然后对蛋白产物进行纯化和洗脱，通过western-blot检测特异性蛋白是否与靶DNA片段结合； 质谱法用于鉴定可能与 DNA ...