原理 其基本原理是将靶蛋白-GST（Glutathione-S-transferase谷胱苷肽巯基转移酶）融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽标记的磁珠上,作为与目的蛋白亲和的支撑物,充当一种“诱饵蛋白”,目的蛋白溶液与之孵育,可从中捕获与之相互作用的“捕获蛋白”(目的蛋白),洗脱结合物后通过SDS-PAGE电泳分析,从而证实两种蛋白间的相互作用或...
GST pull down的主要原理是利用DNA重组技术将已知蛋白与GST融合,而融合蛋白通过GST与固化在载体上的GTH(谷胱甘肽)亲和结合。简单来说,我们假定a蛋白和b蛋白可能存在互作,将纯化的融合GST的a蛋白和纯化的b蛋白以及能特异性结合GST的Sephrose 4B beads混合在一起孵育一定时间,然后洗去未结合的蛋白,煮沸beads进行SDS-PAGE...
拉下实验（Pull-down assay）是一个行之有效的验证酵母双杂交系统的体外实验技术，近年来越来越受到广大研究者的青睐。其基本原理是将靶蛋白-GST融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和树脂上，作为与目的蛋白亲和的支撑物，充当一种“诱饵蛋白”，目的蛋白溶液过柱，可从中捕获与之相互作用的“捕获蛋白”（目的蛋白），洗脱结...
其原理是利用亲和层析的方法,通过已知的结合子(例如抗体、亲和标签等)选择性地“拉下”目标蛋白,然后识别诱捕蛋白的相互作用分子。这项技术的应用范围包括但不限于疾病诊断、药物研发和基因功能研究等领域。科研人员可以利用pull-down assay技术来筛选具有特定蛋白质结合活性的小分子化合物,为药物设计提供重要参考。 1.2...
GST下拉实验原理简介 GST-pull down 技术是一种在体外验证蛋白质相互作用的试验技术，可用来进一步验证酵母双杂交的结果。将靶蛋白与 GST（谷胱苷肽巯基转移酶, Glutathione-Stransferase）融合，使其与谷胱甘肽亲和树脂结合，然后在目的蛋白溶液过柱时，便可从中捕获与靶蛋白相互作用的目的蛋白，洗脱结合物后通过western ...
它通过利用亲和层析原理,实现对蛋白质间相互作用的检测与分析。本文将结合最新的研究成果,共享关于pull-down assay结果的相关内容,希望对读者有所帮助。 一、实验设计 我们在进行pull-down assay实验时,首先需要选择目标蛋白和其潜在的相互作用蛋白。在实验设计阶段,我们需要明确每个蛋白的结构特点和功能,以便正确选择...
实验原理:利用重组技术将探针蛋白与GST(Glutathione S transferase)融合,融合蛋白通过GST与固相化在载体上的GTH(Glutathione)亲和结合。因此,当与融合蛋白有相互作用的蛋白通过层析柱时或与此固相复合物混合时就可被吸附而分离。 试剂:NaCl, KCl,Na2HPO4,KH2PO4,Triton-100,IPTG(Merck分装),PMSF(Amersco),Cocktaier...
你可以看看 GST-tag ,his- tag,等等pull down assay 的实验原理,虽然这些是针对蛋白的,但是原理一样,记得做好control就行了. 反馈 收藏