DNA pull-down技术是一种研究体外DNA与蛋白互作的有效方法。与pull-down不同的是，这项技术是以特定DNA序列作为探针，研究或寻找与之相结合的蛋白，常应用于检测鉴定转录因子或组蛋白等。通常将DNA探针与生物素偶联，生物素与链霉亲和素间以高强度的非共价结合，可将DNA探针固定，以便捕获互作蛋白。DNA pull-down一...
基于GST融合蛋白发展起来的pull-down技术称为GST pull-down,这得益于Smith团队在1988年从细菌中纯化出GST融合蛋白,之后逐渐发展为如今研究蛋白互作最常用到的方法之一。GST可以与GSH(谷胱甘肽)结合。GST pull-down的基本原理是将GST融合蛋白作为诱饵蛋白,可与固定在固相支持物上的GSH结合,当把目的蛋白样品经过时,即可得...
为了使pull-down技术更高效且易于应用,研究人员将待捕获的目的蛋白与特定的蛋白标签融合表达,而诱饵蛋白则可以与标签结合,进而捕获目的蛋白,目前pull-down中应用最为广泛的融合标签是GST(glutathione-S-transferase,谷胱甘肽-S-转移酶),此外6×His标签等也可以。为了方便后续检测鉴定,待捕获蛋白也可以融合Flag、HA或Myc...
为了使pull-down技术更高效且易于应用,研究人员将待捕获的目的蛋白与特定的蛋白标签融合表达,而诱饵蛋白则可以与标签结合,进而捕获目的蛋白,目前pull-down中应用最为广泛的融合标签是GST(glutathione-S-transferase,谷胱甘肽-S-转移酶),此外6×His标签等也可以。为了方便后续检测鉴定,待捕获蛋白也可以融合Flag、HA或Myc...
pull-down技术就是先将待研究相互作用的一组蛋白中的一个(A)固定在固相上,然后将另一待研究的蛋白(B)作为流动相通过固相,然后洗脱下来后用B抗体去杂交,如果能杂交出来,那说明B可以和A相互作用. 分析总结。 pulldown技术就是先将待研究相互作用的一组蛋白中的一个a固定在固相上然后将另一待研究的蛋白b作为流动...
Pull down实验，又称拉下实验，是一种体外亲和纯化技术，蛋白Pull down技术可以提供一种诱饵蛋白来特异性识别配体蛋白质，以达到富集、分离、纯化某种配体蛋白质的目的，是体外研究蛋白与蛋白相互作用的有力工具。蛋白质Pull down将被亲和试剂标签（如谷胱甘肽-S-转移酶、组氨酸六肽、生物素）标记的诱饵蛋白固定在某种...
通过pull down技术可以确定已知的蛋白与钓出蛋白或已纯化的相关蛋白间的相互作用关系,从体外转录或翻译体系中检测出蛋白相互作用关系。 为了更有效地利用pull down技术,可以将待纯化的蛋白以融合蛋白的形式表达,即将“诱饵”蛋白与一种易于纯化的配体蛋白相融合。1988年Smith等利用谷胱甘肽-S-转移酶(GST)融合标签从细菌...
植物中许多蛋白之间的相互作用是通过酵母双杂交技术筛选发现的。大多数情况下, 获得表达2种蛋白的稳定转化植株既费时又费力, 故将这些蛋白共表达于自身植物物种中并进行互作验证非常困难。在这种情况下,我们可采用一种瞬时表达系统来快速表达目的蛋白并检测蛋白互作。目前,最常用且较稳定的植物瞬时表达系统是用含有表达...
基于GST融合蛋白发展起来的pull-down技术称为GST pull-down,这得益于Smith团队在1988年从细菌中纯化出GST融合蛋白,之后逐渐发展为如今研究蛋白互作最常用到的方法之一。GST可以与GSH(谷胱甘肽)结合。GST pull-down的基本原理是将GST融合蛋白作为诱饵蛋白,可与固定在固相支持物上的GSH结合,当把目的蛋白样品经过时,即可得...
一、免疫沉淀技术(Immunoprecipitation, IP) 免疫沉淀技术(Immunoprecipitation, IP)主要原理是根据抗原和抗体的特异性结合,利用抗体将靶标蛋白(即抗原)分离出来,只是为了检测某一种蛋白的表达情况。co-IP、ChIP、RIP等技术由IP演化而来,可以用来研究与蛋白结合的分子。