DNA pull-down技术是一种研究体外DNA与蛋白互作的有效方法。与pull-down不同的是，这项技术是以特定DNA序列作为探针，研究或寻找与之相结合的蛋白，常应用于检测鉴定转录因子或组蛋白等。通常将DNA探针与生物素偶联，生物素与链霉亲和素间以高强度的非共价结合，可将DNA探针固定，以便捕获互作蛋白。DNA pull-down一...
下拉实验（pull-down assay）是验证体外蛋白互作的主要方式，也是验证没有成熟抗体的蛋白互作的方式之一。通过体外表达亲和蛋白-GST，将亲和蛋白固化在谷胱甘肽亲和树脂上充当“诱饵蛋白”，将细胞或者组织的总蛋白和此“诱导蛋白”混合孵育后可从中捕获“目标蛋白”，最后通过洗脱的方式将“目标蛋白”洗脱后检测，就可以...
DNA pull-down DNA pull-down技术是一种研究体外DNA与蛋白互作的有效方法。与pull-down不同的是,这项技术是以特定DNA序列作为探针,研究或寻找与之相结合的蛋白,常应用于检测鉴定转录因子或组蛋白等。通常将DNA探针与生物素偶联,生物素与链霉亲和素间以高强度的非共价结合,可将DNA探针固定,以便捕获互作蛋白。 DNA...
Pull down实验步骤 一、Pull down实验特点 Pull down实验是一种广泛用于检测或确认多种蛋白质之间相互作用的体外方法[1]。该方法类似于免疫共沉淀实验,使用亲和配体捕获相互作用蛋白。这两种方法的不同之处在于,…
Pull Down方法是一种利用亲和剂（如GST标签、蛋白A/G磁珠等）将目标蛋白及其相互作用的蛋白一起富集的技术。其基本步骤包括：1）将目标蛋白与亲和剂结合，形成复合物；2）将复合物与亲和剂固定在固相载体上；3）将混合物与固相载体接触，使目标蛋白及其相互作用的蛋白与亲和剂结合；4）洗涤去除非特异性结合的蛋白；...
Pull down实验是一种广泛用于检测或确认多种蛋白质之间相互作用的体外方法[1]。该方法类似于免疫共沉淀实验,使用亲和配体捕获相互作用蛋白。这两种方法的不同之处在于,免疫共沉淀使用固定抗体来捕获蛋白质复合物,而Pull down方法使用纯化和标记的蛋白质作为“诱饵”来结合任何相互作用的蛋白质[2]。
Pull down实验步骤 一、Pull down实验特点 Pull down实验是一种广泛用于检测或确认多种蛋白质之间相互作用的体外方法[1]。该方法类似于免疫共沉淀实验,使用亲和配体捕获相互作用蛋白。这两种方法的不同之处在于,免疫共沉淀使用固定抗体来捕获蛋白质复合物,而Pull down方法使用纯化和标记的蛋白质作为“诱饵”来结合任何...
RNA pull-down一般实验流程 RNA pull-down的实验流程与DNA pull-down差不多,主要区别于探针的获取方法: (1)制备特定RNA探针并做生物素标记,通RNA探针过体外转录方法制备。 (2)RNA探针固相化。 (3)获取蛋白样本,并与固定的RNA探针孵育。 (4)洗脱分离RBP。
Pull down实验步骤 Pull down实验步骤 一、Pull down实验特点 Pull down实验是一种广泛用于检测或确认多种蛋白质之间相互作用的体外方法[1]。该方法类似于免疫共沉淀实验,使用亲和配体捕获相互作用蛋白。这两种方法的不同之处在于,免疫共沉淀使用固定抗体来捕获蛋白质复合物,而Pull down方法使用纯化和标记的蛋白质作为...
Pull Down方法是一种利用亲和层析技术，将目标蛋白质与其相互作用的蛋白质一同富集下来的方法。具体步骤如下：1.目标蛋白质结合：将目标蛋白质与亲和标记（如GST、His等）结合，形成融合蛋白。2.亲和层析：将融合蛋白与亲和树脂结合，通过重力或离心力将融合蛋白及其相互作用的蛋白质富集下来。3.洗涤：用缓冲液洗涤富集...