如下图，A就是典型的免疫共沉淀示意图，B就是用标签抗体取代目标蛋白抗体去结合目标蛋白，C是用特异性亲和填料取代标签抗体与Protein A琼脂糖填料，直接捕获含亲和标签的目标蛋白，也就是我们常用的Pull - down 实验。目前常用的标签有：FLAG、HA、c-myc、GFP、RFP、T7、His、MBP、GST、STREP、V5、Alfa等。尚纯...
图4 我司RNA Pull-down案例展示：（A）体外转录法电泳检测图（阳性），左图：PCR扩增DNA的电泳；右图：体外转录标记RNA的电泳；（B）RNA Pull-down的银染结果；（C）MS差异蛋白鉴定及KEGG分析。伯远医学拥有一流的技术团队、丰富的项目经验，提供专业RNA Pull-down技术服务，适用于RNA与蛋白结合的领域研究，欢迎大...
DNA拉下实验（DNA Pull-down）是体外研究DNA与蛋白互作的有效方法，可以探究DNA与转录调控蛋白质的互作，最常见的应用是验证启动子与转录因子的互作情况。DNA Pull-down原理 将生物素标记的DNA片段结合在链霉亲和素磁珠上，形成磁珠-DNA探针复合体，再与细胞核蛋白孵育，这可以将与DNA结合的蛋白吸附在磁珠上。洗涤去...
图2 RNA Pull-down实验流程图(Panda et al., 2016)。 RNA Pull-down技术实验流程主要包括以下几个步骤: (1)构建含目的基因序列质粒:选择自己感兴趣的基因,根据其序列用同源重组方式或全基因合成构建含目的基因序列质粒;并测序验证序列准确性,并提取含目的基因序列质粒备用; (2)转录模板的获取:T7 RNA聚合酶特异...
因此在实验中通常采用低浓度、长时间诱导表达的方式，以获取足够量的可溶性融合蛋白。伯远生物 GST Pull-down 服务 实验周期 伯远生物案例展示图6 GST Pull-down验证蛋白互作。References：Liu Y, Li M, Lv X et al. Yes-Associated Protein Targets the Transforming Growth Factor β Pathway to Mediate High-Fat...
2. 实验流程图 4. DNA pull down实验流程 4.1 总蛋白提取 4.1.1 细胞样本 洗涤:用1 mL预冷的PBS洗涤样品(约2×10^7个细胞)2次,最后一次尽量吸干PBS。 裂解:根据细胞量加入980 μL裂解液和10 μL蛋白酶抑制剂(100X)。冰上裂解30分钟,每5分钟涡旋一次,每次涡旋10秒。使用超声波细胞破碎仪进行超声处理,功...
1、鉴定的蛋白是直接作用的蛋白，非间接作用的复合体；2、GST标记可把一些难溶蛋白变成可溶蛋白，使实验变得更易操作；3、GSH谷胱甘肽偶联球珠亲和力强，洗脱纯度高。拉下实验（Pull-down）的缺点 1、两个非同一定位的蛋白可能因电荷或是强亲和力的原因造成假阳性，需用其他方法再次验证，例如Co-IP等；2、验证互作...
既未经pull down处理的试验组。为了表明实验体系没有问题。先看input组第一行，使用MBP抗体进行检测，图...
图1 GST Pull-down验证蛋白互作原理图。 操作步骤: 样品处理—GST/His-诱饵蛋白原核表达载体构建—GST融合蛋白表达—GST融合蛋白纯化—Pull-down捕获猎物蛋白—SDS-PAGE电泳—Western blot或LC-MS/MS 二、DNA Pull-down DNA pull-down是一种新颖的体外研究DNA与蛋白互作的实验技术。该技术以研究的DNA序列为探针,寻...
pull-down实验是验证体外蛋白互作的主要实验手段,也是验证无成熟抗体(IP级别)的蛋白互作的方式之一。通过体外表达亲和蛋白-GST/HIS/MBP等(GST、HIS、MBP是最常用的标签),此处以GST(Glutathione S-transferase)为例,将亲和蛋白固化在谷胱甘肽亲和树脂上充当“诱饵蛋白”,将细胞或者组织的总蛋白和此“诱饵蛋白”混合孵育...