Pull down技术的基本原理是将一种蛋白质固定于某种基质上(如Sepharose),但细胞抽提液经过该基质时,可与该固定蛋白相互作用的配体蛋白被吸附,而没有被吸附的“杂质”则随洗脱液流出。被吸附的蛋白可以通过改变洗脱液或洗脱条件而回收下来。通过pull down技术可以确定已知的蛋白与钓出蛋白或已纯化的相关蛋白间的相互作用...
Pull down技术的基本原理是将一种蛋白质固定于某种基质上(如Sepharose),但细胞抽提液经过该基质时,可与该固定蛋白相互作用的配体蛋白被吸附,而没有被吸附的“杂质”则随洗脱液流出。被吸附的蛋白可以通过改变洗脱液或洗脱条件而回收下...
Pull down技术的基本原理是 将一种蛋白质固定于某种基质上(如Sepharose),但细胞抽提液经过该基质时,可与该固定蛋白相互作用的配体蛋白被吸附,而没有被吸附的“杂质”则随洗脱液流出。 被吸附的蛋白可以通过改变洗脱液或洗脱条件而回收下来。通过pull down技术可以确定已知的蛋白与钓出蛋白或已纯化的相关蛋白间的相互...
1. DNA pull-down技术原理 DNA pull-down是体外研究DNA与蛋白互作的有力工具。该技术将生物素标记的DNA片段结合在链霉亲和素磁珠上,再与细胞的核蛋白孵育,纯化出与DNA片段互作的蛋白,洗涤洗脱得到的蛋白产物,做western-blot检测特定蛋白是否与靶DNA片段结合;做质谱鉴定即可筛选出与DNA片段可能互作的蛋白信息(如具体...
DNA pull-down是一种新颖的体外研究DNA与蛋白互作的实验技术。该技术以研究的DNA序列为探针,寻找与该序列结合的蛋白质,最常见的应用是寻找某个或者某些特定基因启动子区域的转录因子/组蛋白。 基本原理: 针对目标区域体外制备脱硫生物素标记的特异性DNA探针,使其与待测蛋白液孵育,可与偶联在磁珠上的链霉亲和素结合...
GST Pull Down Pull down技术的基本原理是将一种蛋白质固定于某种基质上(如Sepharose),但细胞抽提液经过该基质时,可与该固定蛋白相互作用的配体蛋白被吸附,而没有被吸附的“杂质”则随洗脱液流出。被吸附的蛋白可以通过改变洗脱液或洗脱条件而回收下来。通过pull down技术可以确定已知的蛋白与钓出蛋白或已纯化的相关...
一、原理概述 DNA pull-down是体外研究DNA与蛋白互作的有力工具。体外制备生物素标记的靶DNA系列,使其与待测蛋白液孵育,形成“生物素化DNA-蛋白质”复合物。由于生物素与链霉亲和素间的作用是目前已知强度最高的非共价作用之间,因此采用链霉亲和素磁珠将靶DNA及其结合蛋白从待测蛋白液中分离出来。通过western blot...
例如，固定化金属螯合亲和层析(IMAC)树脂，可用于组氨酸标签诱饵蛋白的Pull-Down。Pull-Down的优化需要考虑所采用的亲和系统的特殊性质。Pull-Down的原理根据以下示意图，大家就会一目了然：而Pull-Down所获得的捕获蛋白的分析方式，如下图所示：Pull-Down与蛋白纯化实验的对比：运用重组基因表达蛋白，再进行下游的蛋白的...
▲ GST下拉实验(GST-pull down)技术原理示意图 GST下拉实验原理简介 GST-pull down 技术是一种在体外验证蛋白质相互作用的试验技术,可用来进一步验证酵母双杂交的结果。将靶蛋白与 GST(谷胱苷肽巯基转移酶, Glutathione-Stransferase)融合,使其与谷胱甘肽亲和树脂结合,然后在目的蛋白溶液过柱时,便可从中捕获与靶蛋白...
例如,固定化金属螯合亲和层析(IMAC)树脂,可用于组氨酸标签诱饵蛋白的Pull-Down。Pull-Down的优化需要考虑所采用的亲和系统的特殊性质。Pull-Down的原理根据以下示意图,大家就会一目了然: 而Pull-Down所获得的捕获蛋白的分析方式,如下图所示: Pull-Down与蛋白纯化实验的对比: ...