实验原理: Pull-down实验是一种常用于研究蛋白质相互作用的技术。其基本原理是利用蛋白质之间的特异性相互作用来筛选和鉴定与感兴趣蛋白相互作用的蛋白质。在实验中,首先将感兴趣的蛋白质(通常是已知的蛋白质)与特定的标签(如GST、HIS等)融合,并表达在宿主细胞中。然后,将这些标记蛋白与细胞提取物或重组蛋白混合,使...
DNA pull down 技术是体外研究DNA与蛋白质互作的有力工具。该技术针对目标区域设计特异性DNA探针并经过脱硫生物素标记,标记后探针可以和偶联在磁珠上的链霉亲和素亲和结合,再与总蛋白提取物进行孵育,有互作的蛋白质可以和DNA探针特异性结合,形成磁珠-DNA探针-蛋白复合物,洗涤去除非特异性结合的蛋白质, 2. 实验流程...
最后,通过分析技术(如Western blotting、质谱分析等),可以鉴定和定量与标记蛋白质相互作用的蛋白质,从而揭示它们之间的相互作用。 Pull-down实验的基本原理是基于蛋白质之间的特异性和亲和性相互作用。通过选择适当的标签和实验条件,可以准确地研究感兴趣蛋白质与其他蛋白质之间的相互作用,从而深入了解这些相互作用在细胞功...
GST下拉实验原理简介 GST-pull down 技术是一种在体外验证蛋白质相互作用的试验技术,可用来进一步验证酵母双杂交的结果。将靶蛋白与 GST(谷胱苷肽巯基转移酶, Glutathione-Stransferase)融合,使其与谷胱甘肽亲和树脂结合,然后在目的蛋白溶液过柱时,便可从中捕获与靶蛋白相互作用的目的蛋白,洗脱结合物后通过western blot...
Pull-down验证蛋白互作原理图 实验步骤: 1、构建载体 在进行载体构建时,通常会用常见的蛋白质标签,如GST(谷胱甘肽S-转移酶)、HIS(组氨酸富集标签)、MBP(麦芽糖结合蛋白)等。这些标签对应着多种载体,常见的有PET系列(如pET-28a)和PGEX系列载体(如pGEX-4T1)。
RNA pulldown的原理是用生物素标记RNA模拟目的RNA与蛋白直接孵育结合,这就要求探针序列要与目的RNA序列一致,用circRNA接头互补探针做RNA pulldown不符合实验原理。 实验操作上,首先用circRNA接头互补探针的目的是拉取内源circRNA,但此时孵育温度不确定,与RNA pulldown的孵育温度不相符,另外探针-磁珠复合物与细胞全蛋白孵...
实验原理 GST Pull-down实验的基本原理是将靶蛋白-GST融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和树脂上，作为与目的蛋白亲和的支撑物，充当一种“诱饵蛋白”。作用蛋白溶液过柱后，可从中捕获与之相互作用的“猎物蛋白”（目的蛋白），通过SDS-PAGE电泳结合Western Blot分析洗脱结合物，从而证实蛋白间的相互作用。如果互作蛋白未知，...
GST Pull Down Pull down技术的基本原理是将一种蛋白质固定于某种基质上(如Sepharose),但细胞抽提液经过该基质时,可与该固定蛋白相互作用的配体蛋白被吸附,而没有被吸附的“杂质”则随洗脱液流出。被吸附的蛋白可以通过改变洗脱液或...