2018年诺华公司Beverly M等发表在Anal Bioanal Chem杂志的一篇文章，《Poly A tail length analysis of in vitro transcribed mRNA by LC-MS》，研究基于RNAse T1酶切与oligo dT磁珠纯化得到polyA尾，使用液相色谱质谱联用（LC-MS）检测polyA尾长度的分布，目前该策略是当前mRNA体外制备工艺中较为常用的方法。2022年...
目前已确认,poly(A)尾长度并非如之前设想的那样恒定不变,poly(A)尾中也可以含有非A的核苷酸组分,poly(A)尾长度、翻译效率和mRNA稳定性之间并不是简单的线性关系。 在这篇综述中,作者讨论了poly(A)尾在胞浆中的作用,尤其是对翻译和mRNA稳定性的调节,以及脱腺苷复合物CCR-NOT和PAN2-PAN3去除poly(A)尾的机制...
然而以TAILseq、PALseq、FLAMseq、PATseq及纳米孔测序为代表的测序技术通量大、设备要求高,鉴于体外合成的mRNA通量较小,无法体现测序技术的高通量优势。 参考文献 [1] Beverly M, Hagen C, Slack O. Poly A tail length analysis of in vitro transcribed mRNA by LC-MS. Anal Bioanal Chem. 2018 Feb;410(6...
所有细胞信使RNA的一个共同结构特征是poly(A) tail,它可以通过DNA模板(基于质粒或PCR)共转录引入,也可以通过转录后的酶促过程添加到mRNA中。含有poly(A)区域的质粒在大肠杆菌中重组导致poly(A)尾部广泛缩短。采用分段poly(A)方法我们可以显著减少大肠杆菌中质粒的重组而不会对mRNA半衰期和蛋白质表达产生负面影响。这...
②基于二代或三代测序技术表征polyA,已报道的测序方法包括TAIL-seq、PAL-seq、FLAM-Seq和PAIso-Seq等。 2018年诺华公司Beverly M等发表在Anal Bioanal Chem杂志的一篇文章,《Poly A tail length analysis of in vitro transcribed mRNA by LC-MS》,研究基于RNAse T1酶切与oligo dT磁珠纯化得到polyA尾,使用液相色谱...
真核生物中,几乎每条mRNA的尾部都会带有多聚腺苷酸,即poly(A)。早期基于实验证据的假说认为,poly(A)尾与胞浆中的多聚腺苷结合蛋白(PABPC)促进翻译并阻止mRNA降解(decay),但具体机制并不清楚。最近对Poly(A)尾的作用认识更加丰富:poly(A)结合蛋白可以促...
常用的方法包括TAIL-Seq和PAL-Seq,借助于制备完整的包括polyA尾在内的3’端mRNA测序文库。首先将RNA与生物素化的3’端DNA接头连接,并用RNase T1部分酶切,留下完整的polyA尾,随后使用链霉亲和素磁珠捕获3’端片段。通过凝胶电泳筛选不同条带,并与5’端接头连接,为逆转录、文库扩增和测序提供完整的模板。如图3所...
Poly(A)尾促进mRNA翻译 Poly(A)尾有助于mRNA的翻译状态和稳定性,作为细胞质中基因表达的主要调节因子发挥作用。具体来说,poly(A)尾可以与mRNA 5'端上的7-甲基鸟苷(7-methylguanosine,m7 G)帽协同作用以刺激翻译。哺乳动物的poly(A)尾平均长度约为200nt,其在酵母中平均约70nt。研究发现,具有非常短的poly(A...
综上所述,真核生物成熟的mRNA Poly(A)尾对于mRNA的稳定性和功能至关重要,U/T/G也普遍存在于天然的Poly(A)尾中;这些非A碱基的存在使得mRNA避免快速的被去腺苷酸化,从而增加mRNA的半衰期;同时分段Poly(A)的方案设计不仅解决了mRNA疫苗生产过程中的一大难点,而且还显著提升了蛋白的翻译水平和mRNA的产量。
Poly(A)尾促进mRNA翻译 Poly(A)尾有助于mRNA的翻译状态和稳定性，作为细胞质中基因表达的主要调节因子发挥作用。具体来说，poly(A)尾可以与mRNA 5'端上的7-甲基鸟苷（7-methylguanosine，m7 G）帽协同作用以刺激翻译。哺乳动物的poly(A)尾平均长度约为200nt，其在酵母中平均约70nt。研究发现，具有非常短的...