从上图中可以看出,pET系列的质粒的复制子名称为pBR322,属于松弛型中低拷贝复制子,通常的拷贝数为12~20个/细胞。对于表达质粒来说,由于目的蛋白的高表达会对宿主细胞造成很大的代谢压力,因此表达质粒的拷贝数通常不是特别高。 除了复制子本身的性质,还有很多因素会影响质粒的拷贝数。比如: 1. 插入片段: 如果插入片...
名称:pET28a SnoopTag-MBP 别称:Plasmid#72323 基因长: 规格:默认发少量干粉质粒(现货)大提液体质粒(期货) 质粒宿主:大肠杆菌 质粒用途:蛋白表达 片段类型:ORF 片段物种: 原核抗性:Kan 筛选标记: 荧光标记: 启动子:T7 复制子:pBR322 拷贝数:低
Origin:The origin of replication,由复制起始位点和相关调控元件组成,pET-28a(+)中的复制子属于松弛型中低拷贝型复制子,目标蛋白的高表达会对宿主菌造成较大的压力,所以表达载体的拷贝数通常较低。 Kan:编码氨基糖苷磷酸转移酶,使质粒产生卡那霉素抗性,用于筛选培养过程中含有目标质粒的宿主菌。 Rop:编码ROP蛋白 ...
天然存在的野生型质粒由于分子量大、拷贝数低、单一酶切位点少、遗传标记不理想等缺陷,不能满足克隆载体的要求,因此往往需要以多种野生型质粒为基础进行人工构建。 质粒载体按功能分: 克隆载体—都有一个松弛的复制子,能带动外源基因,在宿主细胞中复制扩增。它是用来克隆和扩增 DNA 片段(基因)的载体。
还是有必要的，Origin：Theoriginofreplication，由复制起始位点和相关调控元件组成，pET-28a(+)中的复制子属于松弛型中低拷贝型复制子，目标蛋白的高表达会对宿主菌造成较大的压力，所以表达载体的拷贝数通常较低。Kan：编码氨基糖苷磷酸转移酶，使质粒产生卡那霉素抗性，用于筛选培养过程中含有目标质粒的...
pet28a是低拷贝质粒,当插入GFP后,会不会影响pet28a-GFP的荧光蛋白强度? 答案 这个主要是看你的GFP蛋白表达量的,和质粒拷贝数多少并没有多大关系.表达量低了,一般是和你的诱导条件有关,你需要优化你的诱导条件.如IPTG浓度,诱导时间,诱导温度等等.相关推荐 1pet28a是低拷贝质粒,当插入GFP后,会不会影响pet28a-GF...
质粒提起过程中存在三种形态，成螺旋、开环与线性，所以出现1-3条带都是正常的，pet28a空载体才5K多，...
如何提高质粒提取时的浓度问题？还有就是PET系列的质粒拷贝数大约是多少，有没有用过拷贝数很大的PET...
名称: pET28a-EYFP 质粒宿主:大肠杆菌 质粒用途:蛋白表达 片段类型: ORF 原核抗性: Kan 荧光标记:黄色 启动子: T7 复制子: pBR322 拷贝数:低 感受态: DH5a 温度: 37 度 背景载体: pET-28a 正向引物: T7 : TAATACGAC
就要适当减少洗脱液的量,我一般都是回收到40~50 μL的,同时要增加洗脱次数,一般两三次足矣.如果以上方法都用遍了还无效,就应该考虑菌种本身的问题,是不是冻融或者传代次数过高,导致质粒本身丢失?质粒本身在大肠杆菌的拷贝数是多少?不行的话建议重新将质粒导入到大肠杆菌感受态细胞中.