由于mCherry和GFP荧光蛋白在酸性环境中表现出不同的稳定性,考虑到抑制自噬流也会诱导LC3-II的积累,研究人员在NCI-H460细胞中转染LC3-mCherry-GFP质粒来监测自噬流。自噬体(黄色)和自噬溶酶体(红色)数量增加,提示唑喹达可激活自噬。透射电镜分析也显示唑...
载体构建与转染构建人PD-L1真核载体的核心步骤为将PD-L1基因序列克隆入pIRES2-EGFP载体中，该载体包含GFP荧光标记基因，便于后期筛选。载体构建后，使用威尼德电穿孔仪进行电转染，优化电转染参数以提高转染效率。转染后，细胞在筛选压力下培养，以保证稳定转染细胞的扩增。稳定转染细胞的筛选与扩增转染后的细胞在加入适...
将绿色荧光蛋白(GFP)与含有棕榈酰化位点的PD-L1(265aa-279aa)序列(命名为S1)的多肽融合,对照组为不包含有C272A突变的多肽序列(命名为S2),结果表明S1可以有效降低PD-L1的棕榈酰化,从而显著降低肿瘤细胞中PD-L1的表达。 这表明,竞争性抑制的策略可以抑制PD-L1的棕榈酰化。 最后,研究团队将设计并开发的PD-L1棕榈...
为了确定 PD-L1 在 T 细胞活化中的作用,将T细胞与健康供体 (HD)分离,并用细胞刺激混合物刺激,并与 siPD-L1 或 siPD-L1-NC转染的 NF2 相关脑膜瘤细胞共培养。分析CD4CD69和CD8CD69细胞的百分比,结果显示,当T细胞与siPD-L1转染的NF2相...
利用细胞膜染色(CellVue)、荧光标记PD-1(GFP)等技术,研究者们观察到,与淋巴瘤细胞(RMA)共培养时,NK细胞会频繁“强吻”这些肿瘤细胞,啃下一块细胞膜还顺手将肿瘤细胞的PD-1贴到自己身上。 动态成像:mua mua mua mua mua (绿色:PD-1-GFP) 如果只是与培养肿瘤细胞的洗澡水上清液一同培养,则无法在NK细胞上检...
作者首先测试了向模型蛋白GFP募集RNF43是否会导致其内化和溶酶体降解。作者通过跨膜结构域将GFP与NanoLuc结构域融合,作为表达和定位报告器。作者接下来将抗GFP单链Fab(scFab)融合到RNF43的N端。在HeLa细胞中表达这些构建体后,作者发现只有抗GFP-RNF43融合导致GFP内化并在溶酶体中共定位。
PD-L1绿色荧光蛋白为构建稳定表达人源hPD-L1分子的小鼠乳腺癌细胞系(4T1),建立BALB/c小鼠乳腺癌肿瘤模型,采用Lipofactamine 3000转染试剂将携带绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein, GFP)和hPD-L1的质粒转入4T1细胞中,经嘌呤霉素筛选获得4T1-hPD-L1单克隆细胞系,通过流式细胞术检测细胞纯度.将构建成功的细胞系...
为了获得PD-1被NK细胞胞啃的直接证据,我们用PD-1绿色荧光蛋白(GFP)融合蛋白补充PD-1缺陷的RMA细胞。在活体成像实验中,NK细胞与肿瘤细胞共孵卵几分钟后获得GFP信号(补充图未展示)。这些实验表明,PD-1与其他蛋白质一起,通过NK细胞的胞啃作用获得。 图3:Trogocytosis (胞啃作用)负责PD-1从肿瘤向NK细胞的细胞间转移...
E.PD-L1-GFP、 HA-PD-L1和PD-L1-Flag蛋白的糖基化模式。用PNG酶F和Endo H处理细胞裂解物并通过 Western印迹分析。F.GFP标记的PD-L1全长(WT)、细胞外结构域(ECD)或细胞内结构域(ICD) 在293T细胞中瞬时表达。然后用或不用5μg/ml衣霉素(TM)处理细胞过夜。使用Western印迹 检查PD-L1的蛋白质表达。G....
图2为本发明中间充质干细胞在GFP-PD-L1慢病毒转染后,细胞膜上表达PD-L1的免疫荧光分析图; 图3为本发明中透射电镜显示表达PD-L1分子的间充质干细胞来源的外泌体(Exo-PD-L1)粒径大小及形态; 图4为本发明中Exo-PD-L1的粒径分布图; 图5为本发明中免疫印迹分析GFP-PD-L1慢病毒转染后,间充质干细胞及其来...