基因敲除目的:程序性死亡配体-1(PD-L1)是免疫调节途径的重要因子,是抗肿瘤免疫疗法中重要的靶标之一.利用CRISPR/Cas9技术成功构建PD-L1基因敲除小鼠模型,并初步分析其表型.方法:构建Cas9和sgRNA载体,并转录获得RNA,通过显微注射方式将RNA注射到C57BL/6小鼠受精卵中,经过鉴定获得F_0代阳性小鼠.F_0代小鼠与野生型C5...
Su等[9]将从黑色素瘤和胃癌患者收集的T 细胞靶向敲除PD-1基因并与高表达PD-L1 的黑色素瘤和胃癌细胞共培养时,发现T细胞的毒性作用以剂量依赖的方式增强并促进肿瘤细胞的死亡。相似的结论在另一项研究中也得到了验证,并且在随后建立的荷瘤小鼠模型中,研究小组发现,相较对照组和空白组,注射PD-1敲除的LMP2A-CTL(...
进一步优选的,所述啮齿类动物为小鼠。优选的,本发明还获得了一种pd-1基因敲除细胞株,使用靶向pd-1基因的载体将细胞株中pd-1基因部分或全部敲除。进一步优选的,使用靶向pd-1基因的sgrna或编码sgrna的dna分子或包含sgrna的载体敲除细胞株pd-1基因的第2号外显子的全部或部分制备获得。本发明的第三方面,涉及一种构建...
利用腺相关病毒(AAV)载体表达人SLC6A3基因,并在新生DTDS模型小鼠侧脑室注射可提供人类DAT的神经元表达,从而改善了小鼠的运动表型、生存期及黑质和纹状体内神经元的存活,尽管在高剂量时出现了非靶向神经毒性作用。成年敲除小鼠中脑立体定位注射AAV2.SLC6A3的基因治疗可避免上述问题,挽救了运动表型和神经退行性病变,...
5. 615小鼠体内LSD1缺失的胃癌细胞通过外泌体PD-L1促进T细胞介导的肿瘤免疫 在动物水平上,来源于MFC细胞的外泌体可以通过PD-L1促进肿瘤生长,降低肿瘤浸润CD8+T细胞比例和肿瘤组织CD3和CD8的表达,抑制T细胞杀伤因子的分泌。而来源于MFC LSD1 KO细胞的外泌体则表现出相反的结果。且外泌体对这些表型的影响可以被PD-...
且外泌体对这些表型的影响可以被PD-1蛋白阻断,证明了LSD1缺失可以通过对外泌体PD-L1的减少发挥免疫重构的作用。 吉凯 本研究中LSD1 CRISPR/Cas9 KO 单载体慢病毒:U6-sgRNA-EF1a-Cas9-FLAG-P2A-puro和U6-sgRNA-SFFV-Cas9-FLAG...
之后通过构建基因敲除细胞系,q RT-PCR,Western Blot,si RNA文库等技术分别在转录和转录后水平继续探索所选药物上调PD-L1表达的分子机制.同时,构建PD-L1 KO细胞系,在免疫功能健全的小鼠LLC或LLC~(PD-L1-)荷瘤模型上验证经筛选的抗肿瘤药物可通过上调PD-L1表达增强PD-1/PD-L1抑制剂对NSCLC的治疗效果.结果:细胞...
方法 利用 CRISPR / Cas9 技术构建 Sdpr 基因敲除小鼠,利用过表达质粒构建 Sdpr 转基因小鼠模型,利用 PCR 鉴定 小鼠基因型,利用 qRT-PCR 和 Western blot 检测 mRNA 和蛋白表达情况,获取小鼠组织进行组织病理学分析,利用 流式细胞术对小鼠免疫细胞比较分析. 结果 获得 Sdpr 基因敲除及转基因小鼠模型. 与野生型...
(lipopolysaccaride binding protein,Lbp) 基因敲除小鼠.方法 根据 C57BL/6J 小鼠的 Lbp 基因序列特征,设计 sgRNA 靶点,删除 Lbp 基因 5'-端蛋白编码保守序列并引入移码突变,使编码 LBP 失活.提取 F0,F1,F2,F3 代小鼠基因组,PCR 鉴定并测序验证 Lbp 基因敲除效果,RT-PCR 测序验证 Lbp 基因转录水平,蛋 ...