从登革病毒感染的C6/36蚊细胞培养液,感染的白纹伊蚊及患者血清中提取病毒RNA用合成的一对引物通过逆录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,取产物用HaeⅢ酶切,琼脂糖凝胶电泳,紫外透射观察,结果,扩增的产物及酶切片段均与预期的靶序列长度和限制酶谱分析相一致,故应用PCR-RFLP(聚合酶酶切片段长度多态性分析)技术是诊断...
应用PCR— RFLP,可检测某一致病基因已知的点突变,进行直接基因诊断,也可以此为遗传标记进行连锁分析进行间接基因诊断。 本实验以家族性甲型血友病患者及其相关成员外周血DNA为模板,PCR扩增凝血因子FⅧ基因的583bp特异片段产物,其中包含MspⅠRFLP多态位点,经MspⅠ酶切后,琼脂糖凝胶电泳检测等位片段的长度(583bp或360bp+...
PCR-RFLP 技术 是以 PCR 为基础的 DNA 分子标记技术,结果准确, 操作简便,同时对实验设备要求也较低, 已用于蚊虫[18] ,果蝇[19] 等生物种的鉴别. 将 PCR-RFLP 方 法用于 疟原虫种鉴定, 为新实施的 WS 259 - 2015 《疟疾的诊断》 提供了一种新的疟原虫核酸检测方 法,为疟疾防治工作提供技术支持. 参考...
全血DNA的提取及PCR-RFLP技术的应用 2014级医学检验技术15班4组 201440045 摘要：以肝素钠抗凝的人全血为材料，以常规的酚氯仿抽提法为基础，采用改进的方法提取基因组。结果表明，提取的基因组纯度高，用琼脂糖凝胶电泳检测基因组主带清晰、无拖尾现象;利用PCR-RFLP技术对人外周全血遗传性疾病的已知突变检测。关键...
利用核酸探针及Southern印迹杂交技术进行基因突变分析时由于诸多限制难以满 足这际工作的需要,自从PCR技术问世以来,建立于PCR技术基础上的突变基因检测技 术发展迅速,它不仅能在短时间内检出发生突变的基因,而且即使获得极微量的组织 亦可经PCR扩增而进行中种检测,加上PCR技术与探针杂交技术,RFLP技术及PCR直接 测序的结合...
荧光定量pcr是pcr技术的延伸，结合荧光标记技术，实现对dna扩增过程的实时监测和定量。其中，taqman探针技术使用特异性荧光标记的探针，与目标dna序列特异性结合后，释放荧光信号进行定量分析。sybr green技术则是一种通用荧光染料，通过与双链dna结合产生荧光信号，用于pcr产物的定量。综上所述，rflp、snp、...
利用PCR—RFLP技术,以环境中存在的16SrRNA为对象,对环境生物的研究已广泛开展并取得了重大成果。自然环境中的生物多样性及其在环境过程中的作用远没有被认识,随着PCR—RFLP技术的应用,将在这方面取得更多的研究成果。1方法简介在海洋和湖泊等沉积环境中生长的生物的RNA(ribonucleicacid)基因的克隆和测序能揭示生物的...
技术基本原理和实例 采用的巢式PCR-RFLP分型技术,其基本原来是利用PCR引物的3’端,对SNP位点附近的碱基进行人为改造,产生一个常规的限制性内切酶识别序列,如SNP rs1321425(rs1321425-来自NCBI的refSNP数据库)的C/G,其任何一个碱基和上下游碱基无法形成一个可直接被限制性内切酶识别的序列,于是我们对SNP位点前的上游...
限制性片段长度多态性(restriction fragment lengthpolymorphism,RFLP)分析技术是分子生物学的重要分析方法之一,用于检测DNA序列多态性。PCR-RFLP 是将PCR技术、RFLP 分析与电泳方法联合应用,先将待测的靶DNA 片段进行复制扩增,然后应用DNA限制性内切酶对扩增产物进行酶切,最后经电泳分析靶DNA 片段是否被切割而分型。