1. PCR-RFLP在生物分类学中的应用 生物体死亡之后,其DNA被释放到自然环境中。由于自然环境的演化过程能沉积和保留一定数量的这类物质,如湖泊的沉积物、琥珀等,就有可能快速扩增得到期望的目的基因或DNA片段,并运用 PCR-RFLP技术对生物的遗传物质进行分析,从而了解生物的进化过程。CarlWoese等通过比较核糖体RNA序列之间...
(1) 生成双链DNA中的特异序列作为探针；(2) 由少量mRNA生成cDNA文库；(3) 从cDNA中克隆某些基因；(4) 生成大量DNA以进行序列测定；(5) 突变的分析；(6) 染色体步移；(7) RAPD、AFLP、RFLP等DNA多态性分析等。二、试剂准备 1. DNA模板 2. 对应目的基因的特异引物（也可能是随机序列组成的6mer脱氧核糖核酸...
五、应用与小结 Sturbaum G D等利用种特异巢式PCR联合限制性片段长度多态性(RFLP)对一种寄生虫Cryptosporidium parvum的卵进行检测。他们设计的引物位于18SRNA区域内,通过对1个、2个、3个、4个、5个、7个和10个卵的检测来评价此种PCR方法的敏感性,发现利用PCR扩增单个卵基因是可行的,但敏感性需要进一步提高。Ma...
(6)染色体步移; (7) RAPD、AFLP、RFLP等DNA多态性分析等。 一、试剂准备 1. DNA模版 2.对应目的基因的特异引物 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步骤 1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。 10×PCR buffer 5 μl dNTP mix (2mM)...
五、注意事项 ①对于许多不同个体或生物中相同基因的扩增及测序研究,必须严格地避免在DNA分离及制备扩增产物时出现交又污染。在配制PCR反应液时,只能使用带活动枪头及活塞的吸量器用于扩增DNA的吸量器绝不能再用于组织DNA的分离或在另一轮扩增前稀释DNA,不含DNA ...
限制性片段长度多态性(restriction fragment lengthpolymorphism,RFLP)分析技术是分子生物学的重要分析方法之一,用于检测DNA序列多态性。PCR-RFLP 是将PCR技术、RFLP 分析与电泳方法联合应用,先将待测的靶DNA 片段进行复制扩增,然后应用DNA限制性内切酶对扩增产物进行酶切,最后经电泳分析靶DNA 片段是否被切割而分型。
注意事项：切胶时应快速操作，在紫外灯下时间长容易伤害到眼睛；溴化乙锭染色后的DNA易受紫外光破坏，故尽量放置于暗室，切带时应使用长波长紫外灯，切胶时间尽量短。胶块一定要充分融化，否则将会严重影响DNA的回收率。把洗脱液加热，使用时有利于提高洗脱液效率。【思考题】1、如何有效提高凝胶纯化...
在临床中,实现 SMA 致病基因精准检测一方面依赖检测技术本身的敏感度和特异度,另一方面,规范的操作流程与相关检测产品的质控也不容轻视。目前,SMN1 基因常用的检测技术主要包括限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)、实时荧光定量 PCR 及多重连接探针扩增技术(MLPA),不同的检测技术特点不同,可总结为下表。
10、限制性片段长度多态性实验(RFLP) 11、降落PCR 12、重叠延伸PCR实验 03 ELISA实验操作最全攻略 【1】ELISA实验操作视频 1、ELISA-1概述 2、实验介绍.wmv 3、实验前准备.wmw 4、实验操作.wmv 5、流程与技巧 6、结果分析.wmv 【2】ELISA经典文献汇总 1、A highly sensitive ELISA for quantification of ad...