2、Q-PCR QuantiFast SYBR Green PCR Kit为两步循环方案,分别为95℃的变性阶段和60℃的联合退火/延伸阶段。该方案对Tm值在60℃以下的引物有效。为了使SYBR Green发挥高效作用,目的序列应当在60-200bp之间。该PCR过程必须以95℃作为第一步的起始孵育反应,以活化HotStar Taq Plus DNA Polymerase.对于96孔板,我们建...
Q-PCR就是定量的PCR,这其中包含real-time PCR real-time PCR指的是用可以实时检测信号的机器来做PCR,...
一、Q-pcr 和 RT-pcr原理上的不同 Q-PCR 也是基于 PCR 的技术,但它引入了荧光探针或荧光染料来实时监测 PCR 反应的进程。荧光信号的强度与目标序列的数量成正比,因此可以定量地测量起始样品中的目标核酸数量。 RT-PCR 结合了逆转录(Reverse Transcription)和聚合酶链式反应(PCR)的过程。 二、Q-pcr 和 RT-pcr...
q-PCR的基本原理包括以下几个步骤: 1.DNA或RNA的提取和纯化:从样品中提取目标DNA或RNA,并经过纯化步骤以去除杂质。 2.逆转录(RT)或DNA扩增:将提取的RNA逆转录为cDNA(逆转录PCR)或直接扩增DNA(DNA PCR)。 3.荧光探针引物的设计:设计用于特定目标序列的引物和荧光探针,探针上带有荧光物质和一个与目标序列互补的...
1 实时荧光定量PCR技术的方法学 1.1 原理 所谓real-time Q-PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。在 real-time 技术的发展过程中,两个重要的发现起着关键的作用:(1)在90年代早期,Taq DNA多聚酶的5′核酸外切酶活性的发现...
RT-PCR是real-time PCR的话，和qPCR是一样的，都是荧光定量PCR。相比普通PCR，会加入染料，便于收集...
原因:(1)PCR反应效率低(2)引物Tms的差异>5°C产生不等的延伸(3)退火温度过低(4)靶序列中意想不到的突变(5)模板材料含有抑制剂。 解决办法:(1)优化引物浓度和退火温度(2)将引物重新设计到靶序列的不同区域(3)退火温度比引物熔点低2-5°C(4)将引物的GC含量保持在30-50%之间(5)根据仔细量化的对照测试测...
如DNA病毒）。这样RT-PCR的长度一般大于q-PCR的要求（一般小于250bp），而且PCR条件也有时不符合要求...
qRT-PCR和RT-PCR当然不是一种，一般qRT-PCR就是你后边提到的那一串英文，中文叫做实时定量PCR，这个不是半定量，southern杂交和Northern杂交才属于半定量。而RT-PCR通常指的是反转录PCR,英文是reverse transcription PCR，就是先将mRNA反转录成cDNA，然后再以cDNA为模板，用PCR方法加以扩增。半定量：半...
Q-PCR仪器使用具体步骤 1. 首先将Mx3000P电源打开,大约1min,将会听到启动的声音。然后打开桌面上的“Mx3000P软件”,确定软件界面右下面的联机标志呈绿色。如果不是绿色而是红色,软件会提示Instrument to PC communications have failed ,这时只需稍等片刻,待仪器自检完成,会自动连接计算机; 2.在“Mx3000P软件”的...