（Ji-hang Yuan, 2014, Cancer Cell）实验流程MS2-RIP技术主要流程包括：MS2蛋白表达载体构建、MS2 BS-lncRNA载体构建、共转化细胞、免疫沉淀、结果分析。MS2蛋白表达载体构建：在MS2两端添加Flag标签和GFP，Flag标签氨基酸序列较短，一般不会干扰MS2的天然构象，可作为纯化标签，
技术介绍：MS2-RIP技术可用于体内检测lncRNA与miRNA的互作。MS2结合位点（MS2 Binding Site，MS2 BS）是一段由19个碱基组成的RNA茎环结构序列，是MS2蛋白的结合位点。构建串联表达MS2 BS-lncRNA表达载体和MS2蛋白表达载体，共转入实验细胞中，MS2蛋白会结合至lncRNA末端的MS2 BS上，然后通过免疫沉淀分离MS2蛋白，与ln...
实验流程 MS2-RIP技术主要流程包括:MS2蛋白表达载体构建、MS2 BS-lncRNA载体构建、共转化细胞、免疫沉淀、结果分析。 MS2蛋白表达载体构建:在MS2两端添加Flag标签和GFP,Flag标签氨基酸序列较短,一般不会干扰MS2的天然构象,可作为纯化标签,GFP可用于观察融合蛋白Flag-MS2-EGFP的表达效率。 MS2 BS-lncRNA载体构建:将MS2...
【结果】成功构建串联表达MS2 BS和DANCR的过量表达质粒用于MS2-RIP实验,该实验可显著富集DANCR以及作为阳性对照的DANCR结合蛋白EZH2。【结论】基于MS2蛋白与MS2结合位点的高效结合特性,我们针对lncRNA DANCR建立了MS2-RIP方法。该方法可有效...
RIP 检测 MEG3VI 富集效 果 将成功构建的 pcDNA3.O-Flag一2XMS2 和 pcDNA3.0一MEG3V1-12XMS2bs 重组质粒共转染 HEK293 细胞 ,48 h 后收集细胞做 RIP ,RIP 获得 的 RNA一蛋白复合物用 TRIzol 提取 RNA ,提取 的 RNA 598 军事医学 2012 年 8 月第 36 卷第 8 期 Mi1 Med Sei,Vol 36 ...
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