mRNA-LNP包封制备是mRNA制剂制备的关键工艺，除了脂质成分配方外，就是工艺过程的控制了，即如何控制mRNA与脂质成分的接触和相互作用过程，通过微流控技术以形成稳定、均一、收率高的mRNA-LNP复合物。mRNA-LNP溶液通过100kD/300kD TFF技术进行浓缩换液，mRNA-LNP复合物被截留，乙醇、制剂被洗滤。最后除菌过滤采用0.2...
mRNA-LNP包封制备是mRNA制剂制备的关键工艺,除了脂质成分配方外,就是工艺过程的控制了,即如何控制mRNA与脂质成分的接触和相互作用过程,通过微流控技术以形成稳定、均一、收率高的mRNA-LNP复合物。mRNA-LNP溶液通过100kD/300kD TFF技术进行浓缩换液,mRNA-LNP复合物被截留,乙醇、制剂被洗滤。最后除菌过滤采用0.22μm...
随后一步的超滤换液可通过切向流过滤(TFF)实现,去除包封过程的有机溶剂等物质,同时对LNP-mRNA进行浓缩,并置换到特定处方缓冲液中,稳定储存。 这一单元的相关参数包含处方组成和工艺参数。处方组成包括缓冲液的组分、pH、保护剂成分和浓度等。TFF工艺参数包括切向流速、跨膜压(TMP)、滤液通量、剪切力等。 2.4 除菌...
mRNA-LNP包封制备是mRNA制剂制备的关键工艺,除了脂质成分配方外,就是工艺过程的控制了,即如何控制mRNA与脂质成分的接触和相互作用过程,通过微流控技术以形成稳定、均一、收率高的mRNA-LNP复合物。mRNA-LNP溶液通过100kD/300kD TFF技术进行浓缩换液,mRNA-LNP复合物被截留,乙醇、制剂被洗滤。最后除菌过滤采用0.22μm...
图5: TFF(切向流过滤)系统 1.3 除菌过滤 除菌过滤是mRNA原液生产的最后一步。mRNA是一种生物活性物质,首选除菌方案是0.22μm滤膜过滤,去除细菌等微生物的同时保持mRNA的生物活性。除菌过滤后的mRNA原液处于无菌状态,利于mRNA原液稳定储存,用于随后的LNP包封工艺。
为此,提出了无RNAse的纯化方法,使用氯化钙沉淀,然后进行切向流过滤(TFF),分别去除高分子量 RNA 和低分子量 RNA。这两个步骤也有助于减少微生物蛋白质和宿主DNA,并且可以浓缩产物。此外,在色谱分析之前进行浓缩可以减少柱上样时间,从而加速整个过程。 纯化过程中,基于不同原理的层析步骤可分离不含宿主DNA、RNA、蛋白...
但在 IVT 产物质量较高的情况下(完整度高,副产物低),可以采用添加蛋白酶 K+TFF 的工艺进行下游纯化,蛋白酶 K,作为一种高效的广谱丝氨酸蛋白酶,能够有效的去除与核酸结合的蛋白质杂质。由于蛋白酶 K 的分子量约 30KD,TFF 工艺则建议采用 300KD 的孔径更易于去除蛋白酶 K 及 NTPs 等杂质,相较传统工艺,在...
mRNA-LNP溶液通过100kD/300kD TFF技术进行浓缩换液,mRNA-LNP复合物被截留,乙醇、制剂被洗滤。最后除菌过滤采用0.22μm除菌级过滤器冗余设置,截留细菌等微生物污染物。最终,进行无菌灌装。 (LNP结构) (LNP-mRNA成品的工艺流程) 在mRNA技术在传染病疫苗领域获得突破性进展的同时,mRNA技术在其它领域的应用也正在展开...
作为替代，可改用切向流过滤(TFF)和色谱技术高效去除杂质。下一步是体外转录，即以线性化pDNA为模板转录合成mRNA。 这一酶促反应采用天然转录工具，包括RNA聚合酶和核苷三磷酸。转录后，未成熟mRNA需要在5’端加上帽子，加强其在细胞中的稳定性和转导效率。加帽有共转录和酶法两种方式。共转录加帽通常将帽类似物...
首先,使用TFF装置对样品进行纯化、浓缩及缓冲液置换。接下来,使用层析填料进一步纯化。以Oligo dT柱层析为例,赛默飞生物工艺的POROS Oligo (dT)25由脱氧胸腺嘧啶(dT-25) 配体组成,通过特有的linker连接到50μm POROS基质上,dT-25配体通过 AT 碱基配对与带有polyA 的 mRNA ...