随着mRNA和脂质纳米颗粒（LNP）技术的发展，基于LNP这一非病毒载体实现CAR 的体内递送的设想有望实现。由于LNP的肝脏趋向性，mRNA-LNP介导的CAR-T疗法面临的首要挑战是：如何实现mRNA的T细胞靶向。使用抗体修饰LNP（也称为抗体偶联LNP, Ab-LNP）是一种有效的解决方案。那么，T细胞表面有哪些标志物，如何选择T细胞靶向...
为了进一步探索 B10 LNP 的可翻译性,作者继续将 CD19 特异性 CAR mRNA 递送至原代人 T 细胞,用流式细胞术进行表达评估,并以临床标准递送方式EP作为对照(图 5A)。结果,EP 和 B10 LNP产生了较高的平均荧光强度(MFI)值,有效了表达CAR...
研究人员在心力衰竭小鼠模型中注射靶向CD5的LNP mRNA,评估了体内CAR-T细胞疗法的疗效。实验观察到,Ab-LNP成功将CAR mRNA高效地递送到T淋巴细胞中,在体内产生了瞬时且有效的CAR-T细胞。 这项研究的突破性在于,研究人员构建了一种体内...
04 B10 LNP产生低细胞毒性的功能性CAR T细胞 为了进一步探索 B10 LNP 的可翻译性,作者继续将 CD19 特异性 CAR mRNA 递送至原代人 T 细胞,用流式细胞术进行表达评估,并以临床标准递送方式EP作为对照(图 5A)。结果,EP 和 B10 LNP产生了较高的平均荧光强度(MFI)值,有效了表达CAR,并且二者的活 T 细胞转染率...
其次,在使用 B10 LNP 将 CAR mRNA 递送至原代人T细胞中时,再次验证了其与 EP 相当的表达和低细胞毒性。最后,在与Nalm-6 ALL细胞的共培养试验中,B10 LNP 生成的 CAR T 细胞能够诱导与 EP 和慢病毒 CAR T 细胞相同的有效癌细胞杀伤。上述结果,均证实了 B10 LNP 是 CAR T 细胞工程的有潜力的递送平台。
这进一步证实了 B10 LNP 是将 mRNA 递送至 T 细胞的有前途的平台。接下来，作者又在原代人 T 细胞中评估了 S2、A16 和 B10 -LNP 在的 mRNA 递送，以拟合和证实mRNA CAR在临床的可行性。具体为，将从健康供体中分离出的 CD4+和CD8+T 细胞，以1：1的比例混合后使用 Dynabeads 激活。然后用封装荧光素酶 ...
如此，合成后的LNP表面将会带有CD5的抗体。体内（图1. 左）体外（图1. 右）实验均显示，带有CD5抗体的LNP可以很好的靶向T细胞，并成功将LNP内部的mRNA递送至T细胞表达。图1. 左：体外实验中（in vitro），FAPCAR+T 细胞比例；右：体内实验中（in vivo），FAPCAR+T 细胞比例；2）改造的T细胞如何识别靶细胞...
关于体内CAR-T细胞的作用机制,其实整体上和ex vivo的CAR-T没有本质区别。也是遵循着进入T细胞,表达CAR蛋白和改造T细胞的过程。 以将装载有mRNA的CD5靶向LNPs通过静脉注射到实验动物体内。在抗体介导的靶向作用下,LNP表面的抗体与循环T细胞表面的相应抗原结合,使得LNP能够特异性地靶向T细胞。通过抗体-抗原相互作用,LNP与...
该产品为目前全球首款获批SLE临床试验的基于mRNA-LNP的细胞治疗产品。通过表达可特异性识别BCMA抗原的CAR，与成熟B淋巴细胞和浆细胞表面的BCMA结合，靶向杀伤免疫细胞，消除升高的自身抗体，是SLE患者一种全新的、安全有效的潜在治疗选择。目前在全球范围尚无CAR-T疗法获批用于治疗SLE。与传统的CAR-T产品相比，该产品...
在通过LNP和电穿孔两种方法将抗CD19 CAR mRNA递送至T细胞的对比实验中,发现LNP方法的转染效率 (TE) 显著高于电穿孔。并且观察到更高的细胞存活率和同质程度更高的CAR表达,这是对CAR-T产品的最终细胞产量产生积极影响的重要参数[3]。研究还表明,与电穿孔和/或慢病毒转染相比,LNP介导的CD19 CAR-T细胞表现出同等...