这种脂质-mRNA加合物无法采用毛细管电泳（CE）鉴定，但是，在IP-RP HPLC色谱图上表现为独特的晚洗脱峰(LP)，与mRNA主峰形成鲜明对比。这项研究找到了之前被忽略的一项非常重要的质量监控参数：脂质-mRNA加合物含量。必须通过原材料控制、制造工艺参数、配方设计和 LNP 储存条件来减轻脂质-mRNA加合物反应的发生。同时...
由于加合脂质的大小疏水性不同,mRNA-脂质加合物在IP-RP HPLC 色谱图上呈现出不同的保留时间。将七个不同批次的相同可电离脂质与mRNA进行混合制备,在IP-RP HPLC 色谱图上不同批次的LP丰度存在差异,这说明加合反应可能是由可电离脂质的杂质驱动的,而不是脂质本身的化学反应性。通过高反应性可电离脂质,了解完整加...
由于加合脂质的大小疏水性不同,mRNA-脂质加合物在IP-RP HPLC 色谱图上呈现出不同的保留时间。将七个不同批次的相同可电离脂质与mRNA进行混合制备,在IP-RP HPLC 色谱图上不同批次的LP丰度存在差异,这说明加合反应可能是由可电离脂质的杂质驱动的,而不是脂质本身的化学反应性。通过高反应性可电离脂质,了解完整加...
他们通过反相离子对高效液相色谱(IP-RP HPLC)鉴定出脂质与mRNA发生加合反应生成的一类杂质,这种杂质通过常规mRNA分析手段无法检测到,由源自可电离阳离子脂质的降解成分添加到碱基或者核糖上引起。
星耀小TIP：2022年美国药典（USP）制定的《mRNA疫苗质量分析方法》草案中，基于RNase H切割作用，推荐RNase H与离子对反相高效液相色谱（IP-RP-HPLC），用于mRNA加帽率的测定：①使用RNase H特异性切割mRNA，以产生带或不带帽结构的5’端单链寡核苷酸序列；②通过IP-RP-HPLC分离寡核苷酸，使用C18柱、流动相A（0....
这种脂质-mRNA加合物无法采用毛细管电泳(CE)鉴定,但是,在IP-RP HPLC色谱图上表现为独特的晚洗脱峰(LP),与mRNA主峰形成鲜明对比。这项研究找到了之前被忽略的一项非常重要的质量监控参数:脂质-mRNA加合物含量。 必须通过原材料控制、制造工艺参数、配方设计和 LNP 储存条件来减轻脂质-mRNA加合物反应的发生。同时,也...
文章分别对三家不同供应商的eGFP mRNA利用离子对反相液相色谱法(Ion-Pair Reversed-Phase Liquid Chromatography,IP-RPLC)与毛细管凝胶电泳(Capillary Gel Electrophoresis, CGE)进行了纯度分析,分析方法和程序如表1所示。其中,为了在IP-RPLC中实现mRNA的...
文章分别对三家不同供应商的eGFP mRNA利用离子对反相液相色谱法(Ion-Pair Reversed-Phase Liquid Chromatography,IP-RPLC)与毛细管凝胶电泳(Capillary Gel Electrophoresis, CGE)进行了纯度分析,分析方法和程序如表1所示。其中,为了在IP-RPLC中实现mRNA的高效分离,文中使用了含有4 μm大孔球形聚合物树脂的DNAPac RP柱...
这些先进的mRNA药物及候选疫苗需要采用灵敏且信息丰富的分析方法来表征生物物理特性。现行的参考方法是在高温和添加有机助溶剂的条件下采用离子对反相液相色谱(IP-RP)1-4。 另一种常用方法是采用毛细管凝胶电泳(CGE)5。 如果能够建立改善的方法,阴离子交换(AEX)色谱分离有可能成为一种分析完整mRNA的可靠手段。很少...
作为一种新型治疗药物,mRNA 的大规模生产具有挑战性,并且需要具有监管机构批准方案的生产技术。目前,大规模的mRNA 生产是通过化学、重组或基于酶的系统实现的。系统的选择取决于正在合成的 mRNA 的特性和各自的临床应用,如下所述。 图3. IVT 和 DS 纯化工艺以及生产 DNA 模板...