microRNA(miRNA)是一种长度约为19-25nt单链RNA,一般参与转录后调节基因表达。作为非编码RNA(ncRNA),目前大量的研究显示一些差异表达miRNA在众多的疾病中扮演者重要的角色,而了解miRNA差异表达,荧光定量PCR是最基础、应用最广的检测和定量miRNA的方法。 由于miRNA的长度比较短,因此传统的荧光定量并不适用,下面介绍的两...
microRNA(miRNA)是一种长度约为19-25nt单链RNA,一般参与转录后调节基因表达。作为非编码RNA(ncRNA),目前大量的研究显示一些差异表达miRNA在众多的疾病中扮演者重要的角色,而了解miRNA差异表达,荧光定量PCR是最基础、应用最广的检测和定量miRNA的方法。 由于miRNA的长度比较短,因此传统的荧光定量并不适用,下面介绍的两...
microRNA(miRNA)是一种长度约为19-25nt单链RNA,一般参与转录后调节基因表达。作为非编码RNA(ncRNA),目前大量的研究显示一些差异表达miRNA在众多的疾病中扮演者重要的角色,而了解miRNA差异表达,荧光定量PCR是最基础、应用最广的检测和定量miRNA的方法。 由于miRNA的长度比较短,因此传统的荧光定量并不适用,下面介绍的两...
1.3 RT-PCR也被用来检测miRNA前体的表达水平, 其他基于PCR技术检测miRNA的方法有引物延伸法,就是在引物的5 末端加一个特异标记,可以定量测定低丰度的RNA含量;原位杂交技术(CISH,FISH)可以方便的检测miRNA的时空表达的差异。 1.4 芯片(microarrays)技术[46,47]是一种较快的研究miRNA表达的方法。 二、反转录引物分类...
3 RT反应 25℃ 5min 50℃ 15min 85℃ 5min 反应完毕后,5000rpm离心5s,尽快放于冰上,直接进行PCR反应。如暂时不用,请放置于-20°C以下温度,在半年内使用完毕,不要反复冻融。模板如具有复杂二级结构或高GC区域,可将反应温度提高至55℃。 您的浏览器不支持本视频播放,请升级浏览器。 推荐产品 推荐产品:...
PCR扩增引物:加尾法的上游引物的设计相对简单,大多数只需直接将目的 miRNA的成熟序列中的U改为T。这时将模板序列上下游引物放到BeaconDesigner7中检验,在上游引物的两端适当地删减几个碱基,调整引物的GC比和Tm值,尽量保证不出现自身二聚体即可。加尾法不用考虑反转录引物与上游引物形成二聚体的问题。以hsa-mir-26a...
本研究团队2022年也报道了一种高灵敏度的数字定量PCR (dqPCR)技术,该技术以数字PCR (dPCR)模式进行定量PCR (qPCR)检测[2]。这个基于微孔阵列的平台最初是为了确定脂质纳米颗粒(LNPs)中DNA载量的异质性而开发的。以dPCR维度分析LNPs以确保捕获单...
实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR)/qRT-PCR,是指在PCR反应体系中加入荧光标记物,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过扩增曲线对未知模板进行定量分析的方法。 2、 实验检测项目 检测项目 3、 样品要求 1)动物、植物组织样品:>100mg (黄豆粒大小) ...
三步法PCR反应程序 附: Q:茎环法、加尾法二者如何选择? A:茎环法的灵敏度和特异性相较于加尾法要更高,但其属于特异性逆转录,一次逆转录只能检测一个miRNA;而加尾法可对miRNA进行无差别逆转录,属于高通量逆转录,一次逆转录可检测多种miRNA。此外,miRNA加尾法逆转录无法使用普通的逆转录试剂盒进行逆转录,因为其过...
如若需要调整引物的Tm值或延长荧光定量PCR产物的长度,可于5’端添加C/G碱基或通用序列5’-ACACTCCAGCTGGG-3’或5’-TCGGCAGG-3’等。 反向引物:统一反向引物URP(unified reverse primer)为茎环部分反向互补序列,不同miRNA反向引物通用,本次实例qPCR引物为: 当然所有的引物也可利用专门的软件进行设计,此处列举...