microRNA(miRNA)是一种长度约为19-25nt单链RNA,一般参与转录后调节基因表达。作为非编码RNA(ncRNA),目前大量的研究显示一些差异表达miRNA在众多的疾病中扮演者重要的角色,而了解miRNA差异表达,荧光定量PCR是最基础、应用最广的检测和定量miRNA的方法。 由于miRNA的长度比较短,因此传统的荧光定量并不适用,下面介绍的两...
microRNA(miRNA)是一种长度约为19-25nt单链RNA,一般参与转录后调节基因表达。作为非编码RNA(ncRNA),目前大量的研究显示一些差异表达miRNA在众多的疾病中扮演者重要的角色,而了解miRNA差异表达,荧光定量PCR是最基础、应用最广的检测和定量miRNA的方法。 由于miRNA的长度比较短,因此传统的荧光定量并不适用,下面介绍的两...
1.3 RT-PCR也被用来检测miRNA前体的表达水平, 其他基于PCR技术检测miRNA的方法有引物延伸法,就是在引物的5 末端加一个特异标记,可以定量测定低丰度的RNA含量;原位杂交技术(CISH,FISH)可以方便的检测miRNA的时空表达的差异。 1.4 芯片(microarrays)技术[46,47]是一种较快的研究miRNA表达的方法。 二、反转录引物分类...
手把手教学——miRNA的逆转录和荧光定量PCR microRNA(miRNA)是一种长度约为19-25nt单链RNA,一般参与转录后调节基因表达。作为非编码RNA(ncRNA),目前大量的研究显示一些差异表达miRNA在众多的疾病中扮演者重要的角色,而了解miRNA差异表达,荧光定量PCR是最基础、应用最广的检测和定量miRNA的方法。
miRNA研究的关键是如何准确且特异性地检测分析miRNA。目前检测分析miRNA的方法中最为常用的是荧光定量PCR。但是miRNA本身相对较小,传统的RNA提取、反转录和定量方法难以高效的保证miRNA的检测,选对适配的方法此时则显得尤为重要。
1、 实验简介 实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR)/qRT-PCR,是指在PCR反应体系中加入荧光标记物,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过扩增曲线对未知模板进行定量分析的方法。 2、 实验检测…
荧光定量PCR是通过荧光染料(SYBR Green)或荧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对产物进行分析,计算待测样品模板的初始浓度。可以用于检测miRNA的基因表达水平。 实验流程: 取材-RNA提取逆转录成cDNA-miRNA引物设计合成-QPCR扩增-数据分析-发报告 ...
本研究团队2022年也报道了一种高灵敏度的数字定量PCR (dqPCR)技术,该技术以数字PCR (dPCR)模式进行定量PCR (qPCR)检测[2]。这个基于微孔阵列的平台最初是为了确定脂质纳米颗粒(LNPs)中DNA载量的异质性而开发的。以dPCR维度分析LNPs以确保捕获单...
在miRNA的PCR定量检测实验中,由于miRNA的长度在22nt左右,而引物的的一般长度是15-30nt,无法做到根据其序列直接设计引物用于PCR扩增,因此实验的第一步通常是在miRNA的反转录中利用一些特定的方法使得得到的cDNA得以延长,从而更加有助于下游检测。通常有两种反转录的方法,即“茎环法”和“加尾法”。