随后,MeRIP-seq/m6A-seq实验方法的建立使得有机会对该修饰的分布和功能进行深入研究[1]。 利用MeRIP-seq/m6A-seq技术鉴定全基因组范围内具有m6A修饰的区域。其原理为通过特异识别m6A修饰的抗体,对细胞内具有m6A修饰的RNA片段进行免疫共沉淀。对沉淀下来的RNA片段进行高通量测序,结合生物信息学分析,即可在
MeRIP-seq的核心原理是抗原-抗体特异性结合。实验过程中,首先将RNA样本片段化至200-500核苷酸长度,随后使用针对m6A修饰的特异性抗体对甲基化RNA片段进行免疫沉淀富集。富集的RNA片段经过文库构建后,通过高通量测序与未富集的对照组数据进行比对,最终通过生物信息学分析确定m6A修饰的精确位置。 ...
MERIP-seq的原理是,首先将RNA样品切成短片段,然后使用m6A特异性抗体选择性地富集m6A修饰的RNA片段。富集后的RNA片段可以通过RNA测序进行分析,以确定m6A修饰的位置和丰度。 MERIP-seq的主要优点是,它可以检测特定RNA上的m6A修饰,因此可以提供更准确的信息。此外,它可以在较短的时间内分析大量的RNA样品。然而,这种方法也...
实验流程包括以下几个关键步骤: RNA提取与片段化:从样本中提取总RNA,并通过物理或化学方法将RNA片段化,以便后续抗体结合。 免疫共沉淀:使用针对特定修饰(如m6A)的抗体,富集含有修饰的RNA片段。 洗脱与检测:通过洗脱步骤回收富集的RNA片段,并使用qPCR、芯片或高通量测序(meRIP-seq)进行检测,分析修饰的分布和功能。
2. merip-seq技术的原理 merip-seq技术是以m6A修饰的特异性抗体为基础的RNA测序方法。该技术首先利用抗m6A抗体特异性地结合m6A修饰的RNA分子,然后通过抗体-RNA复合物的沉淀和纯化,将m6A修饰的RNA分子与未修饰的RNA分子进行分离。接下来,对分离得到的m6A修饰的RNA分子进行测序分析,从而得到m6A修饰的RNA的鉴定和定位信息...
MeRIPseq2技术：易基因创新开发的MeRIPseq2技术提高了免疫沉淀平行性，实现不同样本的相对定量，大大降低了实验成本，解决了大样本量m6AQTL关联分析的高成本问题。定制服务：易基因提供的MeRIP技术包括一系列定制服务，覆盖从技术优势、研究方向到实验策略和分析内容等，以满足不同科研需求。研究成果与应用：...
一、甲基化RNA免疫共沉淀(MeRIP-seq/m6A-seq)测序技术原理 表观转录组研究中，m6A RNA甲基化修饰是重要现象之一。m6A主要发生在终止密码子和3’UTR附近，参与调控mRNA的稳定性、二级结构、microRNA靶标识别以及基因表达调控等。MeRIP-seq/m6A-seq技术通过特异识别m6A修饰的抗体，对细胞内具有m6A修饰的RNA...
MeRIP-qPCR就是MeRIP实验后进行一个qPCR。 这里的MeRIP实验同MeRIP-seq测序中的其实相同:对RNA进行片段化。然后每个样品一分为二,一部分片段用针对该修饰的特异性抗体与RNA片段进行免疫共沉淀(IP),留为IP样品,另一部分不进行IP直接留作Input样品。之后对两部分RNA片段分别进行逆转录和qPCR。如果是测序,就是在这里把...
超微量MeRIP-seq(Methylated RNA immunoprecipitation with next generation sequencing,甲基化RNA免疫共沉淀结合高通量测序技术)是在转录组层面研究细胞内mRNA以及LncRNA的甲基化,即m6A(腺嘌呤N6位甲基化)定位的技术。 其基本原理直接针对total RNA进行m6A抗体富集,利用残留的rRNA增加建库RNA起始量,并使用UMI 超低起始量建...