逆转录实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)是一种结合了逆转录PCR和实时荧光定量PCR的技术,可以对RNA分子进行定量分析。RT-qPCR先通过反转录酶将RNA逆转录成cDNA,然后利用qPCR技术对cDNA进行定量分析。RT-qPCR技术广泛应用于RNA表达水平的研究,如基因表达分析、病毒载量检测等。 RNA的荧光定量PCR引物要求与普通qPCR相同,...
🔟 干燥与溶解:室温晾干后,加入适量DEPC水(推荐20ul)溶解。测量浓度,进行后续RT-PCR。 1️⃣1️⃣ RT-PCR:逆转录时,逆转的量与Input相同。 1️⃣2️⃣ 结果分析:计算Δct=CT RIP-CT Input,表达量=2^(-Δct)。 通过这些步骤,你可以深入探索RNA修饰的奥秘。🔎📚 0 8 发表评论 发表 ...
但由于与普通PCR存在很多异同,可能你还是会存在一些疑问。放心!云序生物这就给你解答! 6、MerRIP-qPCR为什么没有内参基因? (1)MeRIP-qPCR不需要内参来进行样本间的均一化矫正 传统的RT-qPCR中,每个样本都要做一个内参基因,如哺乳动物会选择GAPDH,而miRNA则会选择U6。那么是不是m6A-IP-qPCR就真的没内参了呢?其...
我们先进行一个简单的计算,常规的RT-qPCR1个反应(1个复孔)需要的totalRNA至少0.1-1μg左右。我们按照最小反应起始量来算的话,那么1个反应需要至少100ng的totalRNA,3个技术重复(3个复孔),总计totalRNA为300ng。 我们知道totalRNA中绝大部分为rRNA,那么只有不到5%的RNA为我们需要研究的对象。PCR反应需要引物跟...
⑦ RNA提取: 从免疫复合物中提取RNA,使其可以进行后续的分析,如逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、RNA测序或微阵列分析。 RNA pull-down RNA pull-down的主要目的是通过特定的RNA分子(通常是已知的非编码RNA或mRNA的片段)来富集与之相互作用的蛋白质,以便进一步研究这些相互作用的性质和功能。RNA pull-down的基本步骤...
相信通过上面的学习,你已经基本掌握MeRIP-qPCR这项技能啦!但由于与普通PCR存在很多异同,可能你还是会存在一些疑问。放心!云序生物这就给你解答! 6、MerRIP-qPCR为什么没有内参基因? (1)MeRIP-qPCR不需要内参来进行样本间的均一化矫正 传统的RT-qPCR中,每个样本都要做一个内参基因,如哺乳动物会选择GAPDH,而miRNA则...
Real-time RT-PCR, RT-qPCR 逆转录实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)是一种结合了逆转录PCR和实时荧光定量PCR的技术,可以对RNA分子进行定量分析。RT-qPCR先通过反转录酶将RNA逆转录成cDNA,然后利用qPCR技术对cDNA进行定量分析。RT-qPCR技术广泛应用于RNA表达水平的研究,如基因表达分析、病毒载量检测等。
3. 定量PCR检测 1) 将Mix在4℃下融解,轻柔地上下颠倒混匀并进行短暂离心。 2) 冰上配制下表中的反应液 3)将反应管进行短暂离心,确保所有反应液在反应孔底部。 4)采用三步法程序进行反应: 循环数步骤温度时间荧光采集 1预变性95℃5minNo 40变性95℃10sNo ...
此外,试剂盒中包含了对照IgG抗体,阴性和阳性内参引物等,便于用户进行实验质控,保证了实验的严谨性。优化过的实验流程极其简洁和高效,富集得到的m6A RNA可以广泛应用于后续的定量RT-PCR、高通量测序以及其它检测分析,已帮助用户发表多篇高水平论文。 GenSeq® m6A MeRIP试剂盒升级版...
此外,试剂盒中包含了对照IgG抗体,阴性和阳性内参引物等,便于用户进行实验质控,保证了实验的严谨性。优化过的实验流程极其简洁和高效,富集得到的m6A RNA可以广泛应用于后续的定量RT-PCR、高通量测序以及其它检测分析,已帮助用户发表多篇高水平论文。 GenSeq® m6A MeRIP试剂盒升级版...