那是因为高通量测序可以对所有被m6A抗体富集下来的RNA进行全转录层面的扫描分析,一旦m6A抗体有非特异性富集,在数据呈现上我们可以明显发现reads的分布比较乱且没有规律,而特异性富集则reads几乎富集在哺乳动物的3’ UTR区和植物的5’ UTR和3’ UTR区。所以这就是测序不需要IgG文库,而我们做m6A-IP-qPCR 需要IgG富集...
所谓m6A-IP-qPCR也叫MeRIP-qPCR,即利用m6A抗体在富集到带甲基化修饰的RNA后,下一步使用qPCR直接对富集到的RNA进行定量的一种技术。 这种技术可以做到对发生甲基化的RNA进行相对定量,是一种低成本的检测方法,仅需m6A抗体,A/G免疫磁珠,磁力架和qPCR仪及配套试剂盒即可开展这类实验。 第一步提取total RNA,作为可选...
那是因为高通量测序可以对所有被m6A抗体富集下来的RNA进行全转录层面的扫描分析,一旦m6A抗体有非特异性富集,在数据呈现上我们可以明显发现reads的分布比较乱且没有规律,而特异性富集则reads几乎富集在哺乳动物的3’ UTR区和植物的5’ UTR和3’ UTR区。所以这就是测序不需要IgG文库,而我们做m6A-IP-qPCR需要IgG富集...
所以按照total RNA不打断直接进行IP然后进行m6A-IP-qPCR,由于m6A修饰本身存在大小那么4-5μg total RNA,最后估算大致可以验证1-2个基因。 所以接下来我们就要详细讨论下m6A-IP-qPCR 是如何计算相对表达量的。MeRIP-qPCR 是m6A-IP-qPCR 的另一种说法。所以从名称上我们就能发现,m6A-IP-qPCR基本和常规的RIP-qPCR...
所谓m6A-IP-qPCR也叫MeRIP-qPCR,即利用m6A抗体在富集到带甲基化修饰的RNA后,下一步使用qPCR直接对富集到的RNA进行定量的一种技术。 这种技术可以做到对发生甲基化的RNA进行相对定量,是一种低成本的检测方法,仅需m6A抗体,A/G免疫磁珠,磁力架和qPCR仪及配套试剂盒即可开展这类实验。
背景N6-甲基腺苷(m6A)是真核生物中存在的RNA分子中最常见和最丰富的修饰。m6A修饰被甲基转移酶复合物METTL3催化,并被最近发现的m6A RNA脱甲基酶FTO和ALKBH5除去,它们以α-酮戊二酸(α-KG)和Fe2 +依赖性方式催化m6A脱甲基。研究表明,METTTL3,FTO和ALKBH5在许多生物过程中都发挥着重要作用,从发育,代谢到生育。
所述Epigenase™M6A去甲基化酶活性/抑制测定试剂盒(比色法) 是优化的缓冲液和试剂的一组完整到比色测量总M6A的活性/抑制脱甲基酶使用核提取物或纯化的M6A去甲基化酶等FTO和ALKBH5从广泛的物种的例如哺乳动物,植物,真菌和细菌的各种形式,包括但不限于培养的细胞以及新鲜和冷冻的组织。该套件具有以下优点和功能: ...
所谓m6A-IP-qPCR也叫MeRIP-qPCR,即利用m6A抗体在富集到带甲基化修饰的RNA后,下一步使用qPCR直接对富集到的RNA进行定量的一种技术。 这种技术可以做到对发生甲基化的RNA进行相对定量,是一种低成本的检测方法,仅需m6A抗体,A/G免疫磁珠,磁力架和qPCR仪及配套试剂盒即可开展这类实验。