1. CRY1介导了蓝光诱导的光形态建成中m6A修饰积累和m6A甲基化转移酶(Writers)FIP37的表达 Dot blotting实验验证了蓝光诱导下的拟南芥幼苗总RNA m6A水平显著高于红光或远红光诱导的幼苗(图1a),而在突变株中m6A水平降低(图1b),在蓝光长时间处理后立即升高(图1c),并随着蓝光强度的升高而升高(图1d),但突变株的升高...
1. CRY1介导了蓝光诱导的光形态建成中m6A修饰积累和m6A甲基化转移酶（Writers）FIP37的表达 Dot blotting实验验证了蓝光诱导下的拟南芥幼苗总RNA m6A水平显著高于红光或远红光诱导的幼苗（图1a），而在突变株中m6A水平降低（图1b），在蓝光长时间处理后立即升高（图1c），并随着蓝光强度的升高而升高（图1d），但...
1. CRY1介导了蓝光诱导的光形态建成中m6A修饰积累和m6A甲基化转移酶(Writers)FIP37的表达 Dot blotting实验验证了蓝光诱导下的拟南芥幼苗总RNA m6A水平显著高于红光或远红光诱导的幼苗(图1a),而在突变株中m6A水平降低(图1b),在蓝光长时间处理后立即升高(图1c),并随着蓝光强度的升高而升高(图1d),但突变株的升高...
1. CRY1介导了蓝光诱导的光形态建成中m6A修饰积累和m6A甲基化转移酶(Writers)FIP37的表达 Dot blotting实验验证了蓝光诱导下的拟南芥幼苗总RNA m6A水平显著高于红光或远红光诱导的幼苗(图1a),而在突变株中m6A水平降低(图1b),在蓝光长时间处理后立即升高(图1c),并随着蓝光强度的升高而升高(图1d),但突变株的升高...
Dot blotting是将不同稀释浓度的RNA热变性至尼龙薄膜交联，经抗m6A抗体、二抗体孵育后曝光显影，通过斑点大小判断m6A含量。该法操作简单，但只能对m6A整理含量进行定性或半定量检测。比色法的核心原理与酶联免疫反应类似，将待测RNA或标准品结合至微孔板，依次加入特异m6A捕获抗体、检测抗体和显色液，最终显示颜色深浅...
常用的RNA m6A修饰整体水平检测技术包括高效液相色谱-质谱联用、Dot blotting及比色法。高效液相色谱-质谱联用采用串联质谱获得RNA消化后的分子和碎片离子峰,根据m6A和总A的比例计算出m6A整体的修饰程度,实现对碱基定性和定量分析,操作繁琐,对设备要求高[6]。Dot blotting是将不同稀释浓度的RNA热变性至尼龙薄膜交联,...
采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)、western blotting和免疫荧光染色法检测METTL14和FAT4在眼黑色素瘤细胞和组织中的表达。 建立细胞模型和异种原位移植 (Orthotopic Xenograft) 肿瘤模型以鉴定METTL14和FAT4在眼部黑色素瘤生长中的作用。 采用RIP-qPCR、m6A MeRIP-seq、miCLIP-seq和RNA稳定性实验来研究FAT4对m⁶...
本研究通过Dot blotting实验发现蓝光能诱导RNA m6A修饰水平升高,而cry1突变体中的m6A修饰降低,表明CRY1参与调控蓝光诱导m6A修饰过程。进一步研究发现蓝光可部分通过CRY1调节甲基转移酶复合体成员FIP37基因的表达;在蓝光下,突变体幼苗下胚轴伸长对蓝光的敏感性减弱,幼苗下胚轴变长,表明FIP37正调节蓝光介导的光形态建成。
采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)、western blotting和免疫荧光染色法检测METTL14和FAT4在眼黑色素瘤细胞和组织中的表达。 建立细胞模型和异种原位移植 (Orthotopic Xenograft) 肿瘤模型以鉴定METTL14和FAT4在眼部黑色素瘤生长中的作用。 采用RIP-qPCR、MeRIP-seq、miCLIP-seq和RNA稳定性实验来研究FAT4对m6A水平的作...
(6)清洗:于洗涤缓冲液中轻轻洗涤3此,每次10分钟。 (7)在室温下在黑暗中将3 ml Western Blotting底物孵育5分钟。于天能全自动化学发光图像分析系统记录斑点印迹结果。 【实验服务流程】