【实验方案:基于微流控芯片制备核酸脂质纳米颗粒(mRNA-LNP合成为例)(附:LNP合成质量检测、转染细胞等实验方案)】 本篇内容仅供已购客户参考。 实验材料: 实验步骤: 1.配制脂质-乙醇溶液: LNP 的成分与分子量见下表: 所有成分总浓度配置成12 mM(约7.5 mg/ml)的浓度。如果需要摸索磷脂对LNP最终粒径的影响条件,...
mRNA 定量的总体精度为 3.9% RSD,LNP样品中的mRNA平均质量分数结果为 38.83 μg/g ± 1.5 μg/g。 左图:酸水解碱基校准物和 QC(裸 mRNA)的 LC-MS/MS (MRM)总离子色谱图TIC 右图:酸水解 LNP-mRNA (ProMab) 的 LC-MS/MS (MRM) 提取...
而后将携带荧光素酶、增强绿色荧光蛋白(Enhanced Green Fluorescent Protein, eGFP)的LNP-mRNA以不同浓度加入REN细胞中,发现该mRNA编码的荧光素酶和eGFP的PECAM呈依赖性表达(图2B、C)。根据结果得知,PECAM Ab/LNP-mRNA可在体外靶向内皮细胞...
震荡会对mRNA-LNP的物理稳定性产生显著影响,特别是对LNP的尺寸分布和mRNA的封装效率。本研究通过实验室规模的震荡实验,深入探究了震荡对mRNA-LNP药物产品的影响,以及顶部空间体积和LNP含量对震荡应力敏感性的影响。 实验使用了不同mRNA浓度(0.12 mg/mL、0.06 mg/mL、0.01 mg/mL)的mRNA-LNP药物产品,并在2 mL的玻...
一、酸水解-ID-LC-MS/MS 测定mRNA绝对浓度 研究人员购买商业化的Luciferase mRNA,长度为2082个核苷酸。同时,还采购碱基校准品和稳定双同位素标记(stable-isotope-labeled ,SIL)的碱基。使用双精确匹配同位素稀释 (ID) 工作流程设计用于定量测定,在水解之前将 SIL 内部标准碱基预先掺入样品和校准物中,以便对仪器或样品...
该Protocol中使用的mRNA浓度为200 mg/mL，水相缓冲液是100 mM的商业化试剂（pH 4.0）。根据脂质摩尔浓度为12.5 mM计算得到，研究中选择的N/P约为3.34。03 微流控包封 Precision NanoSystems（PNI）微流控设备可以实现纳米颗粒组分在纳升水平以毫秒混合，高效保证混合效果。通过结合优化、精确的泵送和独特的微...
mRNA LNP 配方采用全因子实验设计（DoE）构建 LNP 配方库，将 7 种生物活性磷脂以 5%、15% 和 30% 摩尔浓度添加到基础（Base）配方中，通过微流控混合制备 LNP，混合后稀释、浓缩和纯化，部分用于分析，其余储存于 - 20°C。mRNA LNP 理化性质表征 动态光散射（DLS）和电泳光散射（ELS）分析测量 LNP 粒径、...
将mRNA测定浓度后根据脂质浓度使用柠檬酸缓冲液稀释至所需浓度。 4.微流控混合: 一、装配微流控混合芯片和夹具: 如图1所示,将夹具翻转,右手拨开卡扣,打开夹具. 如图2所示,装入LNP混合芯片. 注意:芯片开口方向(logo正面)与夹具开口对准,芯片要完全陷入卡槽中。
一、酸水解-ID-LC-MS/MS 测定mRNA绝对浓度 研究人员购买商业化的Luciferase mRNA,长度为2082个核苷酸。同时,还采购碱基校准品和稳定双同位素标记(stable-isotope-labeled ,SIL)的碱基。使用双精确匹配同位素稀释 (ID) 工作流程设计用于定量测定,在水解之前将 SIL 内部标准碱基预先掺入样品和校准物中,以便对仪器或样品...
其中mRNA的浓度为1μg/μL,并用N1-甲基假尿苷对其进行修饰。抗体则经由N-琥珀酰亚胺基-S-乙酰硫乙酸酯(N-Succinimidyl-S-Acetylthioacetate, SATA)进行功能化地引入巯基从而允许与马来酰亚胺偶联,随后使用G-25 Sephadex快速旋转蛋白柱去除未反应的成分。紧接着利用硫醚偶联法将抗体上的活性巯基偶联到马来酰亚胺上,...