解析 一篇文献说,LC3-II疏水极性较强,所以电泳迁移率比LC3-I快.LC3-II的实际分子量比LC3-I大,但是表观分子量较小,在SDS-PAGE电泳中,LC3-II分子量定量为14kD,LC3-I分子量定量为16kD.可以看下面这篇文献的Introduction部分....结果一 题目 LC3 2为什么比LC3 1跑的更靠下?不是分子量更大吗? 答案 一篇文
LC3-I的分子量约16KD,由于LC3-II接合了PE基团,理论上LC3-II的分子量比LC3-I更高。但是,由于带负电的PE改变了LC-II的性质,使其疏水性更强,导致其在电泳中迁移率更高,所以在SDS-PAGE中LC3-II显得分子量比LC3-I小。 LC3-I与LC3-II仅有2KD差异,在WB中需注意:建议使用高浓度分离胶(如15%)进行分离;转膜...
LC3-I的分子量约为16KD,对反复冻融较为敏感,且容易在SDS上样缓冲液中降解。由于其在不同组织中的含量存在差异,因此在使用时需要考虑这一因素。 LC3-II:LC3-I经过一系列修饰后与磷脂酰乙醇胺(PE)偶联,形成脂质化形式的LC3-II,定位于自噬体的内外膜上。LC3-II是自噬体的结构蛋白,其含量变化与自噬活动密切相关...
自噬发生时，LC3 蛋白合成后立即在其羧基端被 Atg4 所剪切，产生细胞浆定位的 LC3-I。在自噬过程中，LC3-I 会被包括 Atg7 和 Atg3 在内的泛素样体系所修饰和加工，产生分子量为 14kD 的 LC3-II，并定位到自噬小体中。LC3-II 的含量和发生自噬的程度成正比，LC3-II/I比值的大小可估计自噬水平的高低。得益...
此外,LC3-II的分子量约16KD,LC3-I在电泳后停留在14KD处,两者均为小分子量蛋白,且差距仅2KD。因此在WB时要注意使用高浓度分离胶进行分离(建议约15%),转膜时使用小孔径0.2um的NC膜,采用恒流200mA,转膜40min即可。通过以上步骤,你可以更准确地检测细胞自噬水平,为研究细胞生物学提供有力支持。
LC3-I 和 LC3-II 是小分子蛋白 LC3-I 的分子量约 16 KD,由于 LC3-II 接合了 PE 基团,所以理论上,LC3-II 的分子量比 LC3-I 更高。但是,由于带负电的 PE 改变了 LC-II 的性质,使其疏水性更强,导致其在电泳中迁移率更高,所以,LC3-II 在电泳后,停留在了更小分子量(约 14 KD)处。 小分子量、LC...
小分子量、LC3-I与LC3-II仅有2KD差异,在WB中需注意: · 使用高浓度分离胶(~15%,确认Tris缓冲液的pH值)进行分离; · 转膜时,使用小孔径0.22um转印膜,湿转70V 1.5h即可。对于半干转(如 Trans-Blot Turbo System),则可使用2.5A 7min。 2018年10月,CST技术人员现场检测LC3,得到实验结果如下图所示,LC3-I...
LC3-II 的分子量大于LC3-I,分子间存在极强的疏水作用力,SDS-PAGE 电泳时LC3-II 涌动的速度比LC3-I 快,所以可以检测到两条带,上面的条带为LC3-I,下面的条带为LC3-II,典型的western 结果如下:通过western blot 检测ATG12-ATG5 和LC3 的水平,判断机体的自噬现象。3Weste...
二、性质不同：自噬过程中，LC3-I在ATG7和ATG12-ATG5-ATG16L作用下（和泛素修饰过程很像），与磷脂酰乙醇胺共价结合，这个才是LC3-II，结合在自噬体膜上。LC-II由于磷脂酰乙醇胺的修饰，导致电荷的变化，使得迁移率更快，所以SDS-PAGE中显得分子量比LC3-I小。作用功能 该基因的产物是神经元微管...