LC3是自噬标志物,内质网膜包裹受损的线粒体形成自噬体时,细胞质基质型LC3(即LC3-Ⅰ)会酶解掉一小段多肽,转变为(自噬体)膜型(即LC3-Ⅱ),LC3-Ⅱ蛋白能促使自噬体与溶酶体融合,完成受损线粒体的降解。某研究小组将生理状况相同的大鼠随机分为对照组、中等强度运动组和高强度运动组,并测量各组大鼠心肌细胞中LC3-...
细胞自噬(Autophagy)是一类细胞内物质降解的代谢过程。细胞内待降解的胞内物质首先被自噬小泡包裹,随后被溶酶体中的水解酶降解。 图一 自噬示意图(图片来源于网络) 微管相关蛋白1轻链3 (MAP1LC3),是Atg8在哺乳动物中的同源物。LC3/Atg8 被具有蛋白内切酶活性的Atg4在羧基端剪切,生成胞浆型 LC3-I。在自噬形成时...
要检测自噬的活性,常常使用LC3 (Microtubule-associated protein 1 light chain 3)作为标志物。下面将介绍LC3检测的要点。 1. LC3 I和LC3 II:LC3是一种在自噬过程中参与的蛋白质。它存在两种形式:LC3 I和LC3 II。LC3 I是未修饰的形式,而LC3 II是经过磷酸化和脂化修饰的形式。LC3 II在自噬过程中会转移到自噬...
LC3-I通过Atg7 和 Atg3(分别对应 E1 和 E2 样酶)参与的泛素样反应,使磷脂酰乙醇胺 (PtdEth,PE) 偶联,生成脂质化形式的 LC3,也称作 LC3-II,它可以附着到自噬体(autophagosome)的膜上,是自噬体的结构蛋白。在降解过程中,位于自噬溶酶体外膜的LC3-II被半胱氨酸蛋白酶Atg4B移除后回收,位于内膜的LC3-II则与包裹...
目前的检测金标准是通过电镜观察膜状结构的自噬体以及检测自噬标志物LC3。虽然电镜可直接观察到自噬,但由于需要电镜设备和一定的实验技能,其无法满足所有研究者的需要,所以更常见的是检测自噬标志物LC3。理解细胞自噬对认识衰老、分化及发育、免疫及清除微生物、肿瘤等疾病的病理生理过程有重要意义。 图1. 细胞自噬机理...
WB常见指标——自噬标志物LC3 WB常见指标——⾃噬标志物LC3 摘要 LC3特点实验要点 LC3A/B/C有细胞/组织类型分布特点查询细胞/组织中各亚型的表达谱，选择合适靶 标的抗体 LC3-I可转变为LC3-II检测LC3-I和LC3-II使⽤LC3A，LC3B或者 LC3A/B的抗体均可。脂化、膜相关蛋⽩超声确保充分裂解 ⼩分⼦量蛋...
小优细节君今天要介绍的主角是目前公认的自噬标记物:微管相关蛋白1的轻链3(microtubule-associated-proteinlight-chain-3,LC3) LC3蛋白合成后被具有蛋白内切酶活性的Atg4在羧基端剪切,产生胞浆定位的LC3-I。在自噬过程中,LC3-I会被包括Atg7和Atg3在内的泛素样体系修饰、加工,与磷脂酰乙醇胺(PE)偶联,形成脂质化形式...
小优细节君今天要介绍的主角是目前公认的自噬标记物:微管相关蛋白1的轻链3(microtubule-associated-proteinlight-chain-3,LC3) LC3蛋白合成后被具有蛋白内切酶活性的Atg4在羧基端剪切,产生胞浆定位的LC3-I。在自噬过程中,LC3-I会被包括Atg7和Atg3在内的泛...
LC3-II作为自噬体膜上的标志性蛋白，其含量在自噬过程中起着决定性作用。当自噬体内容物被溶酶体降解时，LC3-II的降解导致自噬体中LC3含量降低，显示出自噬活动的进行。在实验室中，我们常遇到LC3A/B的标签，这是对哺乳动物中四种LC3异构体（LC3A、LC3B、LC3B2和LC3C）的简化描述。LC3A和LC3B是主要...
自噬形成过程中LC3会发生聚集的现象,无自噬时,GFP-LC3融合蛋白弥散在胞浆中;自噬形成时,GFP-LC3融合蛋白转位至自噬体膜,使用LC3荧光慢病毒感染目的细胞,通过共聚焦显微镜拍摄, 实验周期及交付标准: 实验周期:2-3周 交付标准:荧光图片、半定量分析、实验报告(实验步骤、试剂、仪器)...