野生型Kras激活/失活效应是受控的,而突变型Kras蛋白功能异常,持续处于激活状态,导致肿瘤细胞的持续增殖。将loxp-stop-loxp以及含有G12D的exon2替换Kras的exon2,建立Kras基因G12D条件性点突变小鼠品系,该小鼠与Cre小鼠交配后可获得G12D点突变小鼠。Kras(LSL-G12D/LSL-G12D);纯合子胚胎期即发生死亡。
研究者利用类器官培养技术与CRISPR/Cas9技术相结合,在实验室构建了一套等基因胰腺类器官平台,野生型胰腺类器官 (WT);Pdx1-Cre,KrasLSL-G12D/+ 类器官 (KC);Pdx1-Cre,KrasLSL-G12D/+,Tp53LSL-R172H/+ 类器官 (KPC);Pdx1-Cre,KrasLSL-G12D/+,Smad4-/- (KSC) 与 Pdx1-Cre,KrasLSL-G12...
为了进一步模拟肿瘤进展,研究人员使用CRISPR-Cas9和特定gRNA靶向Smad4基因(一种在50%进展性PDAC中失活的抑癌基因),在KC和KPC类器官中生成了两种高级PDAC类器官,其基因型分别为Pdx1-Cre; Kras LSL-G12D/+; Smad4-/-(KSC)和Pdx1-Cre; Kras LSL-G12D/+; Tp53 LSL-R172H/+; Smad4-/-(KPSC)。该平台...
在无胸腺裸鼠体内皮下肿瘤形成试验也证实了RASON在KRASG12D或KRASG12V诱导的MEF细胞转化中的关键作用:与植入同一小鼠对面的对照细胞相比,RASON KO几乎完全消除了肿瘤形成。KRAS介导的MEF细胞恶性转化需要RASON 为了进一步验证RASON在原代MEF细胞中的功能,研究人员从胎儿期的LSL-KrasG12D小鼠中分离出MEF细胞,并使用慢...
KRASG12R在人类与小鼠胰腺癌中恶性特征较弱,KRASG12R患者生存率较高。KRASG12R中增加的标志物主要和KRAS信号减弱及NF-kB/TNFa信号转导相关;KRASG12D中增加的标志物主要和EMT、mTORC1信号转导及增殖相关。小鼠模型LSL-KrasG12R/D中,...
K-rasG12D的表达是被内源性的启动子调节的。如果全身性用Cre诱导的话,小鼠会得胰腺癌。(小鼠由Tyler Jacks实验室制作)。LSL=Loxp-Stop-Loxp 重要的参考文献:Genes Dev.2001 Dec 15;15(24):3243-8. we used a Lox–Stop–LoxK-rasconditional mouse strain (referred to asLSL-K-ras G12D), in ...
目前国际上应用最广泛的肺癌动物模型就是Kras-LSL-G12D小鼠模型,可以通过与肺上皮细胞 特异性的Cre转基因小鼠杂交来实现Kras突变体的激活,从而导致肺癌的发生。有研究表明 [3,4,5],通过SPC-Cre小鼠与Kras-LSL-G12D小鼠杂交,从而获得了从肺部炎性反应到肺腺瘤进展时程较长的慢性自发肺部肿瘤小鼠模型。Kras-G...
iKras P 细胞中的Kras G12D 失活显著降低了IRE1α蛋白水平、Xbp1剪接体以及XBP1s靶标Edem1和Sec61a1的表达水平(图2A)。作为对照,Dox处理对组成性激活的LSL-Kras G12D 细胞中的IRE1α水平没有影响。相比之下,ATF 6几乎不受影响,并且磷酸化PERK与响应于Kras G12D 失活的IRE1α/XBP1负相关(图2A)。出乎...
在该研究中,通过LSL-KrasG12D激活诱导肺腺癌小鼠模型,发现CBX4缺失的LSL-KrasG12D突变小鼠中肺腺癌发生多,发展快,且预后更差。然而在体外细胞实验中发现,在使用Adeno-Cre病毒处理最初几天内,超50%的Primary Cbx4-/-,KrasG12D细胞凋亡。而后续的实验也证明的确存在一小部分细胞在长期培养中存活,即Selected Cb...
模型示例:Kras-LSL-G12D肺癌肿瘤模型 野生型Kras激活/失活效应是受控的,而突变型Kras蛋白功能异常,持续处于激活状态,导致肿瘤细胞的持续增殖。目前国际上应用最广泛的肺癌动物模型就是Kras-LSL-G12D小鼠模型,可以通过与肺上皮细胞特异性的Cre转基因小鼠杂交来实现K-ras突变体的激活,从而导致肺癌的发生。