强基因抑制效果:使用dCas9-KRAB CRISPRi系统进行转录抑制通常可以获得高水平的基因抑制效果。 更多适用的基因种类:由于dCas9-KRAB CRISPRi系统是在DNA水平抑制基因表达,因此适用于多种转录本,包括mRNA、非编码RNA、microRNA、反义转录本、核定位RNA以及聚合酶III 转录本的转录抑制。 特异性:dCas9-KRAB CRISPRi系统可...
dCas9-KRAB CRISPRi慢病毒载体系统主要包含gRNA表达载体和dCas9-KRAB表达载体两部分，设计基因抑制实验时仅需构建gRNA表达载体。这一系统的优势在于不改变内源基因组背景，能实现高水平的基因抑制效果，适用于多种转录本的抑制，并且具有较高的特异性，几乎无脱靶现象。然而，dCas9-KRAB CRISPRi系统在基因...
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其中，Cas9 中的 HNH 和 RuvC 结构域分别负责切割靶标 DNA 中与 sgRNA 配对和 非配对的链。在本产品中，Cas9 的 H840 和 D10 都被突变为 A，使 Cas9 的 HNH 和 RuvC 结构域均 失活，获得 dCas9 蛋白。因此，dCas9 只有结合靶标 DNA 的活性，而没有切割靶标 DNA 的活性
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4、本文描述的这种系统不限于dcas9,而是可以与其他基因阻遏物靶向系统,如包含选定的znf dna结合结构域的工程化锌指、tet阻遏物或tale偶联。基于tale-krab的转录阻遏物载体已被用于敲低多个基因靶标,如zhang等人,2015[22]所述,并且已被用于真核启动子的四环素可逆沉默[23]。
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