X–Gal是β–半乳糖苷酶(β–galactosidase)的底物,水解后呈蓝色。基于这个特点,pUC系列载体DNA(或其他带有lacZ基因载体DNA)以lacZ缺失细胞为宿主进行转化时、或用M13噬菌体载体DNA进行转染时,如果在平板培养基中加入X–Gal和IPTG,由于β–半乳糖苷酶的α–互补性,可以根据是否呈现白色菌落(或噬菌斑)而方便地挑选出...
蓝白斑筛选减轻了在筛选阳性克隆菌落时的工作量。 使用浓度: IPTG浓度:50mg/ml;X-gal浓度:20mg/ml 直接涂板法: 取IPTG溶液10l,X-gal溶液20l滴在培养基上,同时滴加50～100l无菌水或无菌LB,用涂布棒涂抹均匀,放至表面无水后即可使用。 预制板: 倒板时,在温度降至50℃后。每100mlLB中加入250l的IPTG溶液和...
X-Gal的作用机理及IPTG-X-gal片剂的生产方法实验步骤 1.首先将X-Gal制成20 mg / ml的二甲基甲酰胺（DMF）溶液（在-20°C下黑暗保存），然后将200μl的上述溶液和100μl的上述溶液添加到100 ml琼脂培养基IPTG中（24 mg / ml）和100μlAmp（100 mg / ml）制成X-Gal，IPTG，Amp平板培养基，将DNA片段插...
X-Gal在β-半乳糖苷酶的催化下水解成蓝色，因此常用于转基因筛选测试，例如蓝点和白点筛选或β-半乳糖苷酶原位染色检测实验，在蓝点和白点测试中，可以根据菌落的颜色简单地选择转化子。X-Gal是β-半乳糖苷酶的底物，水解后呈蓝色。基于此功能，当以lacZ缺陷型细胞为宿主转化pUC系列载体DNA（或其他带有lacZ基因的载...
细菌蓝白斑筛选原理:IPTG为安慰型诱导物,可诱导β-半乳糖苷酶的产生,X-gal是β-半乳糖苷酶的作用底物,在β-半乳糖苷酶的作用下X-gal被切割成半乳糖和深蓝色的物质:5-溴-4-靛蓝,有色物质可使所在的菌落呈现蓝色。但当含有lac启动子的质粒中插入了外源基因,则不能产生β-半乳糖苷酶,因此不能分解X-gal产生...
其原理是:pUC质粒含Ampr,可供菌落筛选,质粒载体带有大肠杆菌乳糖操纵子的lacZ’基因,该基因含一段编码β-半乳糖苷酶氨基末端145个氨基酸α-肽的DNA片断,IPTG可诱导此片断合成,此片断能与宿主细胞所编码的缺陷型β-半乳糖苷酶实现基因内α-互补,形成完整的β-半乳糖苷酶。该酶能催化无色底物X-gal生成半乳糖和深...
X–Gal是β–半乳糖苷酶(β–galactosidase)的底物,水解后呈蓝色。基于这个特点,pUC系列载体DNA(或其他带有lacZ基因载体DNA)以lacZ缺失细胞为宿主进行转化时、或用M13噬菌体载体DNA进行转染时,如果在平板培养基中加入X–Gal和IPTG,由于β–半乳糖苷酶的α–互补性,可以根据是否呈现白色菌落(或噬菌斑)而方便地挑选出...
X-Gal的作用机理及IPTG-X-gal片剂的生产方法实验注意事项 1.培养噬菌体时，在顶级琼脂中的添加量为：50μl/ 3 ml（20mg / ml）。2.含X-Gal的培养基应在4℃的黑暗环境中保存，必须在1-2周内使用。3.为便于实验操作，还可以根据细菌溶液的体积和板数来计算X-gal和IPTG储备溶液的浓度，并直接添加到准备...
实验方法原理 显色底物 X-gal 可与细菌培养物混合,与溶化的顶层琼脂混合后铺于选择性培养板。 实验材料 重组质粒转化的 E.coli 试剂、试剂盒 IPTG 溶液 X-gal 溶液 仪器、耗材 LB 或 YT 琼脂板 LB 或 YT 顶层琼脂 恒温块 木制牙签或接种环 实验步骤 一、材料1.
X–Gal是β–半乳糖苷酶(β–galactosidase)的底物,水解后呈蓝色。基于这个特点,pUC系列载体DNA(或其他带有lacZ 基因载体DNA)以lacZ 缺失细胞为宿主进行转化时、或用M13噬菌体载体DNA进行转染时,如果在平板培养基中加入X–Gal和IPTG,由于β–半乳糖苷酶的α–互补性,可以根据是否呈现白色菌落(或噬菌斑)而方便地挑...