通常IP-WB实验会以input(全细胞裂解液)作为阳性对照样品,以空白IP作为阴性对照样品,因此完整的IP-WB结果至少需包含3个泳道的WB显影结果(下图黑色实线框区域,泳道1-input,泳道2-IP,泳道3-IgG/control)。如果为了能够更全面详细的评估IP的实验结果,还可以将IP实验抗体孵育后的上清液也作为阴性对照进行WB检测(泳道4-I...
但不是说ELISA的抗体不能用于做WB,抗体说明书提示做ELISA稀释比例为1:1000,那么你可以试试1:100做做WB。 Part.3 一抗&二抗选择指南 3.1 如何选择一抗 ①根据实验类型选择抗体 确定实验类型,如WB、IHC、ICC、ELISA、FCM分析等,一般抗体说明书会列出该抗体经试验验证过,适用于何种分析类型,如未提及并不意味着该...
Western blot二抗的选择 二抗能够识别Westernblot检测中IP样品的一抗重链和轻链并且会得到两条带(50kDa的重链和25kDa的轻链)。因此,当目的蛋白质在50kDa或25kDa周围时,就很难被检测到。 为避免抗体的轻重链的干扰,推荐使用Rockland T...
在WB 和 IP实验中,破碎细胞或组织与选择和配制裂解液一样重要。 比起一些更软的组织(如脑组织),在准备 WB 或 IP 的样品时,紧密的纤维组织(如肌肉组织)需要更剧烈的方法;对于培养的原代细胞或细胞系,在准备 WB 和 IP 的样品时需要一定的机械搅拌去提取蛋白。机械破碎样品常规的方法和设备如下: ...
因此在做IHC/IF实验中，最合适是用重组蛋白作为抗原制备出来的抗体，除此之外也可以是人工合成多肽作为抗原制备出来的抗体。如果所用的抗体识别的是线性表位(例如识别蛋白上连续的几个氨基酸)那么这种抗体则可以同时用于IHC和WB，而如果抗体识别的是构象表位，则只能用于IHC。IP/CHIP IP(Immunoprecipitation，免疫沉淀)：...
IPKine是一系列新型的二抗产品,能有效解决IP-WB后的轻/重链干扰问题。IPKine系列二抗经过特别优化,不会与IgG的轻/重链分子结合,只识别IgG分子的重/轻链部分,从而能有效解决IP实验后的WB检测中面临的轻/重链干扰信号降到最低。 另外,IPKine系列二抗经过特别优化,其针对目的种属的特异性非常高,同时针对其他非目的种属...
IPKine是一系列新型的二抗产品,能有效解决IP-WB后的轻/重链干扰问题。IPKine系列二抗经过特别优化,不会与IgG的轻/重链分子结合,只识别IgG分子的重/轻链部分,从而能有效解决IP实验后的WB检测中面临的轻/重链干扰信号降到最低。 另外,IPKine系列二抗经过特别优化,其针对目的种属的特异性非常高,同时针对其他非目的种属...
WBIP实验样品制备技巧大部分匀浆仪产生的颗粒较大然而一些带特殊旋转刀片的匀浆仪可以切割产生小到4微米且一致的颗粒这种破碎对于一些小的单细胞样本如细菌酵母效果不明显但是对于大块的骨质的纤维较多的样本特别适用 WBIP实验样品制备技巧 在WB 和 IP实验中,破碎细胞或组织与选择和配制裂解液一样重要。 比起一些更软...
生物医学科研工作者的科研基本离不开抗体,WB(westernblot), IP(immunoprecipitation), IHC ( immunohistochemical 免疫组化), IF(immunofluorescence免疫荧光), ChIP(Chromatinimmunoprecipitation),FC(flowcytometry 流式细胞) 都需要用到抗体,那么这几种实验方法中的抗体有什么区别呢? 我们在CST官网上面找p53的抗体,得到...
📝 实验原理: CO-IP(免疫共沉淀)是一种研究蛋白质间相互作用的技术。通过用特定抗体捕获目标蛋白,可以拉出与之结合的其他蛋白。WB(Western Blot)则是一种通过抗体检测特定蛋白的方法。🔍 实验步骤: Input样品准备:转入A-GFP和B-FLAG的细胞样品,以及空GFP和B-FLAG的对照样品。 CO-IP操作:用GFP抗体和FLAG抗体...