1.移去培养基,用PBS洗细胞两次。 2.收集细胞至1.5 mL EP管内,按比例加入IP Lysis/Wash Buffer,同时加入PMSF等相应的抑制剂,混匀后置于冰上静置5-20min(期间混匀几次)。 3.4 ℃,12000-16000 g,10 min离心收集上清液,置于冰上以备后续实验(或置于-80 ℃长期保存)。 培养皿IP Lysis/WashBuffer推荐使用体积...
重配吧。这个肯定有影响的，不可以用的。包被抗原中的抗原量很少，相对于BSA来说是微量的。这样板子上吸附的都是BSA，而抗原吸附的很少或者没有。后期实验肯定失败。除非你BSA加入特别少（不小心滴了一点点进去），相对于抗原来说都少。这样影响就会少一些。
这些还原剂可以使蛋白质分子的链内二硫键和链间二硫键断裂,使通过二硫键连接的各蛋白亚单位彼此分离,从而在电泳凝胶上显现清晰蛋白条带。 此外,某些特殊的5X蛋白上样缓冲液还添加了安全无毒的特殊荧光染料,如InstantView™ SDS-PAGE蛋白染色及上样缓冲液(5X),它能使蛋白在上样前与上样缓冲液的煮沸过程中被染色...
IgG： 阴性对照，加入非特异性免疫的同源抗体进行IP实验 Input：阳性对照，分别用A和B的抗体对input组进...
6.洗涤缓冲液（冰冷）：HNTG缓冲液，或PBS pH 7.4（产品编号R355028），或根据所需洗涤严格程度的...
2.收集细胞至1.5 mL EP管内,按比例加入IP Lysis/Wash Buffer,同时加入PMSF等相应的抑制剂,混匀后置于冰上静置5-20min(期间混匀几次)。 3.4 ℃,12000-16000 g,10 min离心收集上清液,置于冰上以备后续实验(或置于-80 ℃长期保存)。 培养皿IP Lysis/WashBuffer推荐使用体积: ...
7.向离心管中加入800 -1000 µLIP Lysis/WashBuffer,轻柔混匀数次。收集磁珠,弃上清。再重复洗两次。 质谱送样准备: (一)溶液蛋白定性:(接步骤7) 8.将蛋白从磁珠上洗脱下来。 9.最好测定蛋白浓度后,干冰寄送液氮速冻的蛋白溶液(需指明缓冲液成分和浓度);或将蛋白通过TCA法或丙酮法沉淀,晾干后,干冰或冰袋...
2.收集细胞至1.5 mL EP管内,按比例加入IP Lysis/Wash Buffer,同时加入PMSF等相应的抑制剂,混匀后置于冰上静置5-20min(期间混匀几次)。 3.4 ℃,12000-16000 g,10 min离心收集上清液,置于冰上以备后续实验(或置于-80 ℃长期保存)。 培养皿IP Lysis/WashBuffer推荐使用体积: ...
配制100ml的modified RIPA buffer：1.称取790mg的Tris-Base，加到75ml去离子水中，加入900mg的NaCl，...
准备500 μl 预冷的 Cell Lysis Buffer,分别加入5 μl Protease Inhibitor、5 μl PMSF，混匀后加...