Wash buffer: 盐离子浓度和去垢剂种类、浓度不同,造成洗涤的严格度不同 RIPA:洗涤严格度高,用于蛋白富集或翻译后修饰分析; Cell lysis buffer:Co-IP PBS:严格度最低,用于蛋白复合物分析 清洗流程: 加入500 μL Wash buffer; 重悬,颠倒数次; 4 ℃离心,弃上清; 重复4-5次。 6、洗脱 洗脱目的: 将蛋白从珠...
Wash buffer: 盐离子浓度和去垢剂种类、浓度不同,造成洗涤的严格度不同 RIPA:洗涤严格度高,用于蛋白富集或翻译后修饰分析; Cell lysis buffer:Co-IP PBS:严格度最低,用于蛋白复合物分析 清洗流程: 加入500 μL Wash buffer; 重悬,颠倒数次; 4 ℃离心,弃上清; 重复4-5次。 6、洗脱 洗脱目的: 将蛋白从珠...
RIPA:洗涤严格度高,用于蛋白富集或翻译后修饰分析; Cell lysis buffer:Co-IP PBS:严格度最低,用于蛋白复合物分析 清洗流程: 1 加入500 μL Wash buffer; 2 重悬,颠倒数次; 3 4 ℃离心,弃上清; 4 重复4-5次。 6)洗脱 洗脱目的: 将蛋白从珠子上洗脱 变性洗脱与非变性洗脱: 洗脱流程: 1 加入3XSDS buf...
B003-2IP/Co-IP Wash buffer 100ML 2 — 说明书—1 实验数据: B003用于IP/Co-IP检测。(1) 融合FLAG或HA 标签的质粒转染细胞,48小时后,使用B003-1裂解细胞,提取蛋白质。(2)使用W02 (anti-FLAG tag IP/Co-IP试剂盒) 或 W03(anti-HA tag IP/Co-IP试剂盒)进行IP。(3)IP产物使用B003-2洗涤后,释放...
🧪 加入IP Lysis/wash buffer:向每个EP管中加入200ul的IP Lysis/wash buffer,置于垂直翻转仪上混匀1分钟。 🧪 再次清洗磁珠:使用磁力架吸附磁珠,弃去上清液。 🧪 孵育抗原抗体复合物:将第二步中孵育好的抗原抗体复合物加入到含有磁珠的EP管中,4℃翻转仪孵育2-4小时。通过...
2.Wash buffer 盐离子浓度和去垢剂种类、浓度不同,造成洗涤的严格度不同。 (1)RIPA:洗涤严格度高,用于蛋白富集或翻译后修饰分析。 (2)Cell lysis buffer:Co-IP。 (3)PBS:严格度最低,用于蛋白复合物分析。 3.清洗流程 (1)加入 500μL Wash buffer。 (2)重悬,颠倒数次。 (3)4 ℃离心,弃上清。 (4)...
7. 根据蛋白浓度，用wash buffer（含蛋白酶抑制剂） 将蛋白浓度稀释到1ug/ul，取11ul作为INPUT（根据稀释倍数计算出是百分之几的INPUT），放-20℃备用。8. 另外，将稀释好的蛋白平均分到两个EP管中，一个加目的抗体（1-2ug） ，另一管加同种的IgG (1-2ug) , 4度转盘中过夜。9. 第二天早上过来加...
当pre-clean这一步结束后,我们会将EP管从冷库中拿出来,然后进行离心,离心后的上清我们一般先取30uL给它放于一边作为input。然后剩下的 上清,会加入事先准备好的,并且已经用wash buffer 洗过三遍的 flag beads当中,然后再放入冷库4℃过夜,或者大概4h也可以。
E、使用 0.5mL 1×Wash buffer 清洗沉淀,12000g离心1min,保留沉淀,重复清洗3次; 3)用Western blot进行样品分析 A、在40μL 1×SDS 样品缓冲液中重悬沉淀物,并向80μL的input组中加入5×蛋白上样缓冲液20μL,一并涡旋振荡; B、然后再12000g离心30s,以使附着管壁的珠子和液体到管底; ...
(方法同步骤(3))(7)用1mlWashBuffer洗涤5min,洗涤4次。(8)小心吸干液体,用35ulSDSloadingdye悬浮沉淀。(9)将input和IP样品沸水浴煮5min,冰浴2min,20000g离心2min。(10)SDS-PAGE电泳。(加样时按相同的顺序,即inputA+00+BA+BIPA+00+B A+B,同时跑两块胶用不同的一抗检测,加样时务必防止串样。电泳...