我们从传统的RT-qPCR会发现,每个样本都要做一个内参基因,如上面提到的哺乳动物会选择GAPDH,而miRNA则会选择U6。那么我们的m6A-IP-qPCR 是不是也需要内参基因,根据我们查阅的大量文献来看,绝大部分是没有的,少量文献也会使用到内参基因或者我们称之为negative control gene。 那么是不是m6A-IP-qPCR 就真的没内参...
1. 高灵敏度:acrip-qpcr能够检测到低至单个拷贝的靶基因,具有更高的灵敏度。 2. 高特异性:通过设计特异性的探针,acrip-qpcr能够有效地区分靶基因和其他相似序列,具有更高的特异性。 3. 高通量:acrip-qpcr能够同时检测大量样本中的特定基因表达情况,具有更高的通量。 4. 自动化:acrip-qpcr采用全自动高通量...
所谓m6A-IP-qPCR也叫MeRIP-qPCR,即利用m6A抗体在富集到带甲基化修饰的RNA后,下一步使用qPCR直接对富集到的RNA进行定量的一种技术。 这种技术可以做到对发生甲基化的RNA进行相对定量,是一种低成本的检测方法,仅需m6A抗体,A/G免疫磁珠,磁力架和qPCR仪及配套试剂盒即可开展这类实验。 第一步提取total RNA,作为可选...
所以按照total RNA不打断直接进行IP然后进行m6A-IP-qPCR,由于m6A修饰本身存在大小那么4-5μg total RNA,最后估算大致可以验证1-2个基因。 所以接下来我们就要详细讨论下m6A-IP-qPCR 是如何计算相对表达量的。MeRIP-qPCR 是m6A-IP-qPCR 的另一种说法。所以从名称上我们就能发现,m6A-IP-qPCR基本和常规的RIP-qPCR...
这样一来,acripqpcr技术能够提高PCR反应的敏感性和特异性,同时减少悬浮物和溶液成分对PCR反应的影响。 在acripqpcr技术中,引物的设计和合成是至关重要的一步。首先,我们需要为目标序列设计一对特异性的引物。引物的设计过程中需要考虑以下几个因素:引物的长度(一般为18-25bp),引物的Tm值(40-60C),引物之间的互补...
Human MBIP qPCR Primer Pair,即人MBIP qPCR引物对,主要用于基于SYBR Green的qPCR、One-Step qRT-PCR或semi-quantitative PCR。本引物为预先设计、经过qPCR验证、预混的引物对。 qPCR (Quantitative PCR)即定量PCR,也称实时荧光定量PCR或实时定量PCR (Real-time quantitative PCR)、实时PCR (Real-time PCR),是一...
(4)PCBP1/2和TDP43缺失时ac4C丰度变化的acRIP-qPCR验证:敲低PCBP1/2或TDP43会导致mRNA中ac4C丰度显著降低,表明它们是NAT10介导mRNA乙酰化的关键接头蛋白。 图4:PCBP1/2和TDP43缺失导致野生型(WT)ac4C mRNA中ac4C丰度降低或乙酰化修饰缺失。 A. acRIP-qPCR分析示意图:从对照组以及PCBP1/2、TDP43或NAT10敲...
为了进一步验证ac4C acRIP-seq结果,本研究对心肌细胞中ac4c乙酰化基因进行了acRIP-qPCR检测(图5 D)。结果所示,相对于抗IgG片段,Mybpp1a在抗NAT10免疫沉淀片段中显著富集,并且NAT10过表达进一步增强了这种富集(图5 D)。由于NAT10增加了Mybbp1a mRNA和蛋白水平,本研究在心肌细胞中进行了放线菌素D处理的RNA衰变...
其实就是DNA与蛋白交联固定(终止并固细胞当下生命活动状态),然后裂解细胞并把DNA打碎成200bp左右不等大小的片段,之后用IP级别抗体去捕获已知感兴趣蛋白,得到与其结合的DNA片段,然后将DNA进行纯化,之后可利用PCR、qPCR或者测序等技术进行分析DNA产物的分析和鉴定[15]。
1 目 CONTENTS 2 录3 qRT-PCRCo-IP 激光共聚焦 PART01 qRT-PCR qRT-PCR(实时荧光定量PCR)QuantitativeReal-timePCR和v韩剧 q 定量的 RTPCR 实时聚合酶链式反应 LOGO 各类PCR ①PCR③qPCR LOGO ②RT-PCR④qRT-PCR PCR原理 PCR（PolymeraseChainReaction）即聚合酶链式反应，是指在DNA聚合酶催化下，以母链DNA...