IP-MS即免疫沉淀-质谱联用技术,是一种基于质谱技术的分析方法,通过用特定抗体捕获目的蛋白,然后用质谱仪对免疫沉淀后的复合物进行高通量分析,从而获得蛋白质的定量和定性信息。其原理是通过亲和纯化的方法,利用特异性抗体富集细胞内的靶蛋白,通过加入能够与抗体结合的protein-A/G(预先结合固化在琼脂糖球或磁珠上...
IP-MS实验通常从细胞或组织样品的裂解开始。 相比具有级联放大反应的WB实验,质谱检测的灵敏度在大多数情况下要稍低一些,此外,与特异性检测靶标蛋白的WB不同,质谱检测理论上会对样品中的所有蛋白成分进行检测,因此用于质谱检测的IP实验相比传统IP-WB所需起始细胞量更多。 IP-MS实验起始细胞用量主要需根据细胞种类、靶...
IP-MS,即免疫沉淀(IP ,Immunoprecipitation)结合LC-MS(液相色谱-质谱联用,蛋白质组学研究的核心工具),是筛选和发现目的蛋白(target)在细胞中新的互作蛋白或者新的翻译后修饰的主流技术方案。 通过一次IP-MS实验,能高通量的鉴定和筛选到多个与要研究的目的蛋白(target)存在相互作用的蛋白质(蛋白质复合物组分),从而...
免疫沉淀-质谱(IP-MS)分析是研究蛋白质相互作用的重要技术,能够深入了解细胞信号传导和生物学功能。选择适用于IP-MS分析的最佳实验方案包括抗体选择、条件优化和对照设定等。IP-MS技术的不断发展将为我们解密蛋白质相互作用的奥秘,推动生物学和医学领域的进步。在未来,我们期待IP-MS分析与其他技术的融合,为蛋白质...
IP-MS实验,就像是一个特别厉害的管理员,它能把这些“小玩具”一个一个地找出来,还能知道它们有多少个。 具体来说,IP-MS实验会先用一种特殊的方法,把我们要研究的东西变成很小很小的粒子,就像把一个大蛋糕切成好多好多小块一样。然后,这些小粒子会被送到一个像小隧道一样的地方,在那里,它们会受到一些特殊...
问:IP-MS是基于什么标准筛选互作蛋白的? 答:基于IP-MS质谱数据,可计算IP实验组和对照组中各个蛋白的定量数据,在实验组中定量显著高于对照组的蛋白会被筛选为互作蛋白。本公司默认结果中以差异倍数(Fold change)> 4,T检验P值 <0.05作为互作蛋白的 筛选标准。若未设置重复,则无法计算P值,互作蛋白筛选的可信度也...
co-ip-ms是一种生物药物研究领域常用的实验技术,全称为共免疫沉淀质谱(co-immunoprecipitation mass spectrometry)。它结合了共免疫沉淀(co-immunoprecipitation)和质谱分析(mass spectrometry)两种技术,用于研究蛋白质间的相互作用关系。二、共免疫沉淀的原理 共免疫沉淀是一种通过抗体特异性识别和结合目标蛋白质的...
答:IP-MS的完整流程通常包括: ①细胞裂解 ②细胞裂解液、抗体、Beads孵育 ③Beads清洗 ④蛋白洗脱 ⑤蛋白酶解和脱盐 ⑥质谱检测 ⑦数据分析 其中①-③步需由客户自行完成,实验步骤可参考《谱度众合 IP-MS 实验步骤》 样品可在第③步完成后寄送。WB等预实验可在第③步后分装样品进行。
在进行CO-IP-MS实验之前,首先需要准备样本。样本可以是细胞提取物、组织提取物或体液等。以下是样本准备的基本步骤:1.细胞培养:如果使用细胞样本,首先需要培养细胞并使其达到适当的生长状态。2.细胞裂解:将细胞收集并使用裂解缓冲液裂解细胞膜,释放细胞内的蛋白质。3.蛋白质浓度测定:使用蛋白质浓度测定方法确定...
其他问题解答IP/MS并非都依赖抗原抗体结合,如GST Pull-down是利用GST标签的重组蛋白进行筛选。IP/MS样本送检时,需要送所有条带以全面检测,而非只针对特定条带。样本处理和取材选择要根据实验条件和目的来定,如稳定转基因材料和原生质体/叶片的选择。样本量和取材时间点的选择取决于实验需求和植物生理...