IP-MS即免疫沉淀-质谱联用技术，是一种基于质谱技术的分析方法，通过用特定抗体捕获目的蛋白，然后用质谱仪对免疫沉淀后的复合物进行高通量分析，从而获得蛋白质的定量和定性信息。其原理是通过亲和纯化的方法，利用特异性抗体富集细胞内的靶蛋白，通过加入能够与抗体结合的protein-A/G（预先结合固化在琼脂糖球或磁珠上...
免疫沉淀-质谱(IP-MS)分析是研究蛋白质相互作用的重要技术，能够深入了解细胞信号传导和生物学功能。选择适用于IP-MS分析的最佳实验方案包括抗体选择、条件优化和对照设定等。IP-MS技术的不断发展将为我们解密蛋白质相互作用的奥秘，推动生物学和医学领域的进步。在未来，我们期待IP-MS分析与其他技术的融合，为蛋白质...
IP-MS实验,就像是一个特别厉害的管理员,它能把这些“小玩具”一个一个地找出来,还能知道它们有多少个。 具体来说,IP-MS实验会先用一种特殊的方法,把我们要研究的东西变成很小很小的粒子,就像把一个大蛋糕切成好多好多小块一样。然后,这些小粒子会被送到一个像小隧道一样的地方,在那里,它们会受到一些特殊...
IP-MS实验的检测结果很大程度上取决于IP实验的效果。但与实验室中更常规的IP-WB实验不同,IP-MS实验中的IP部分具有一些特殊的要求,主要为: (1)细胞用量要求更大,建议不少于2e7 (2)抗体特异性和亲和效价要求更高,尽量采用标签抗体或经过IP效果验证的抗体 (3)IP后Beads需清洗去除NP40等去垢剂,可使用PBS等作为...
IP-MS,即免疫沉淀(IP ,Immunoprecipitation)结合LC-MS(液相色谱-质谱联用,蛋白质组学研究的核心工具),是筛选和发现目的蛋白(target)在细胞中新的互作蛋白或者新的翻译后修饰的主流技术方案。 通过一次IP-MS实验,能高通量的鉴定和筛选到多个与要研究的目的蛋白(target)存在相互作用的蛋白质(蛋白质复合物组分),从而...
IP-MS效果评估:评估IP-MS实验效果,提升后续实验成功率,缩短试错周期; 互作蛋白筛选:筛选鉴定诱饵蛋白的相互作用蛋白,辅助选择关键互作蛋白; 动态互作组学:分析不同实验条件下与诱饵蛋白相关的蛋白相互作用的动态变化。 技术原理 通过亲和纯化方法(例如:免疫沉淀、Bio ID等)富集待研究的目的蛋白及其相互作用蛋白,然后与...
在早期的IP-MS实验中,往往通过蛋白成分鉴定的方式筛选互作蛋白。即通过质谱检测分别获得实验组和对照组样品的蛋白鉴定列表,将实验组中鉴定到而对照组中未鉴定到的蛋白筛选为靶标蛋白的互作蛋白。 但这种数据分析方法在目前已不太适宜。一方面,随着质谱仪器性能和检测灵敏度的提升,即使是极微量的非特异性结合或清洗残留...
co-ip-ms是一种生物药物研究领域常用的实验技术，全称为共免疫沉淀质谱（co-immunoprecipitation mass spectrometry）。它结合了共免疫沉淀（co-immunoprecipitation）和质谱分析（mass spectrometry）两种技术，用于研究蛋白质间的相互作用关系。二、共免疫沉淀的原理 共免疫沉淀是一种通过抗体特异性识别和结合目标蛋白质的...
在目前的IP-MS实验中,通常以蛋白的定量差异筛选相互作用蛋白。通过差异倍数和P值筛选是最通用的做法,而P值仅在3次及以上重复数据中才有意义,在单次实验中无法计算。 以Nature上发表的一项新冠病毒蛋白互作组学研究中的部分蛋白质组定量数据为例,提取其中病毒N蛋白相关的IP实验组和对照组数据,以相同的定量筛选标准筛...
IP/MS是寻找与目的蛋白互作的潜在蛋白,与酵母双杂筛库的作用差不多,送只有一条WB条带去做实验就相当于酵母双杂点对点验证,并不是筛库,因此,需要将所有条带打包送去做实验。 6. 自己做完免疫共沉淀之后,送样进行质谱,其质谱的送样标准、胶条处理方法是什么?