接下来,进入另一个重头戏! 双端测序(Paired-end sequencing),这就是 Illumina 测序的另一个核心技术啦! 与单端测序不同,双端测序是从 DNA 或 RNA 样本的两端进行测序,从而获得更多的信息和更高的测序覆盖度。 简单来讲就是,一根链除了从正向读一遍,还要从负向再读一遍,这样是不是就可以把测序的有效长度增加...
接下来,进入另一个重头戏! 双端测序(Paired-end sequencing),这就是 Illumina 测序的另一个核心技术啦! 与单端测序不同,双端测序是从 DNA 或 RNA 样本的两端进行测序,从而获得更多的信息和更高的测序覆盖度。 简单来讲就是,一根链除了从正向读一遍,还要从负向再读一遍,这样是不是就可以把测序的有效长度增加...
测序完成后即可得到Reverse read序列。 前面介绍的都是paired-end的测序,而single-end测序方式是只将index,sequencing primer binding site以及P7/P5添加到 fragamented DNA片段的一端,另一端直接连上P5/P7,将片段固定在Flowcell上桥式PCR生成DNA簇,然后单端测序读取序列 illumina的官方视频: http://v.youku.com/v...
测序完成后即可得到Reverse read序列。 前面介绍的都是paired-end的测序,而single-end测序方式是只将index,sequencing primer binding site以及P7/P5添加到 fragamented DNA片段的一端,另一端直接连上P5/P7,将片段固定在Flowcell上桥式PCR生成DNA簇,然后单端测序读取序列 illumina的官方视频: http://v.youku.com/v...
4、Paired-end sequencing(即对Reverse strand测序) (1)洗脱index2测序产物后,以Flow cell上的P5’为引物,Forward strand为模板进行桥式扩增,得到双链 (2)NAOH使双链变性为单链,并洗去已经测序完成的Forward strand (3)类似的,read primer2结合到靠近P7’的read primer bi...
Paired-end测序已经是现在的主流,它提高了测序长度的同时,又可以为结构变异分析提供新方法。要完成双末端测序,首先要将模板链3’去保护,模板折叠,index片段引入 在聚合酶参与下形成双链桥 然后变性,恢复为单链。注意,这次是将正向链切除并洗去,只留下反向链 ...
测序 Sequencing 1、样本准备 Sample Prep 通过不同实验方法得到的样品,需要先提取样本基因组中的DNA,用超声波将其随机打断。然后使用酶将两端补平,使用 Klenow 酶在3‘ 端加一个 A 碱基(用于连接接头序列)。为了后续扩增,测序分析,需要为这些DNA片段添加特定的接头序列。接头序列是已知的,大概有三...
Paired-end方法是指在构建待测DNA文库时在两端的接头上都加上测序引物结合位点,在第一轮测序完成后,去除第一轮测序的模板链,用对读测序模块(Paired-End Module)引导互补链在原位置再生和扩增,以达到第二轮测序所用的模板量,进行第二轮互补链的合成测序。
–清楚了解Illumina测序流程中的主要步骤–能够描述簇生成（ClusterGeneration）的过程–理解边合成边测序（SequencingbySynthesis）的原理 2Part#15045845_Rev.C FORRESEARCHUSEONLY IlluminaSequencingWorkflowIllumina测序流程 LibraryPreparation文库制备 ClusterGeneration簇生成 cBotMiSeqNextSeqHiSeq2500-Rapid Sequencing测序 Data...
Illumina测序原理 目录 概览制备文库(LibraryPreparation)在测序芯片上生成DNA簇(ClusterGeneration)边合成边测序(SequencingbySynthesis)双侧测序，配对测序(Paired-End,MatePair&Multiplexing)数据分析(DataAnalysis)测序工作流程概览 LibraryPreparation制备文库 ClusterGeneration生成DNA簇 Sequencing测序 DataAnalysis数据分析 测序...