目的:克隆HSV-1 U130 cDNA并测序,构建pEGFP-N1-Fi融合表达载体,为靶向UL30基因的siRNA的设计和筛选奠定基础.方法:从感染HSV-1 F株的病变VERO细胞提取总RNA,二次PCR扩增出UL30 cDNA并克隆至pEGFP-N1质粒,测序鉴定序列;将UL30 cDNA 4个小片段亚克隆至pEGFP-N1形成pEGFP-N1-Fi融合表达质粒,转染VERO细胞,荧光显微镜...
目的:筛选高效沉默HSV-1UL30基因的siRNA,研究siRNA沉默UL30基因后对HSV-1繁殖的影响.方法:设计并化学合成12对靶向UL30基因的siRNA,与pEGFP-N1-Fi融合表达质粒共转染VERO细胞,流式细胞术筛选高效抑制Fi-EGFP融合蛋白的siRNA,实时荧光定量PCR检测siRNA对感染细胞内UL30mRNA表达的抑制效果,CPE法和空斑减数实验评价siRNA对...
长和短部分各有其自身的复制起点,OriL位于UL28和UL30之间,而OriS成对位于RS附近。由于L和S链段可以在任何方向上组装,因此它们可以相对于彼此自由地反转,从而形成各种线性异构体。 病毒进化论 单纯疱疹病毒1基因组可分为六个进化枝。其中有四个在东非,一个在东亚,一个在欧洲和北美,这表明该病毒可能起源于东非。欧...
结果:共转染实验筛选出高效抑制Fi-EGFP融合蛋白的siRNA4、siRNA10及siRNA8,这3对siRNA均能显著降低感染细胞内UL30mRNA的表达水平及病变细胞释放到培养上清的子代病毒滴度,siRNA4和siRNA10在感染后36h对HSV-1的繁殖有明显的抑制效果,其病斑分别比对照组减少61.17%、51.46%(P<0.05),siRNA4、siRNA10及siRNA8组最终...
在西非的4名HIV感染者中发现了另一种变体，其特征是UL30基因(DNA聚合酶)中有27个核苷酸的替换，US4(...
qPCR using TaqMan universal master mix (Life Technologies, Carlsbad, CA, US) was used to quantify exogenous HSV-1 copies and viral genes. The HSV-1 DNA polymerase gene (UL30) was amplified to estimate the amount of viral DNA in each supernatant (copies/ml). Immediate early RL2/ICP0 and ...
The mean (卤standard deviation, SD) number of natural polymorphisms in UL23 was 2.53 (卤2.55), in UL30 it was 0.83 (卤1.02), and in UL5 it was 5.00 (卤1.59) There was no association between HSV1 phenotype and the frequency of substitutions. The results reported herein provide valuable ...
Seven complete open reading frames (ORFs) were predicted, and designated herpes simplex virus 1 (HSV-1) homologues, unique long (UL) 25, UL26, UL26.5, UL27, UL28, UL29, and UL30. Sequence analysis revealed that the arrangement of seven genes in DEV clone-03 strain was collinear to ...
专利权项:1.病毒性角结膜炎HSV-12和VZV多重检测试剂盒,其特征在于,包括:PCRMix、引物和探针、阳性对照、阴性对照;所述的引物和探针为HSV-12和VZV病毒引物和探针,所述的病毒相应的靶标基因分别为:HSV1的UL30DNA聚合酶基因,HSV2的包膜糖蛋白G基因,VZV的ORF29DNA结合蛋白基因。
1.3 HSV-1 UL42蛋白 HSV-1 UL42基因属于早期(Early,E)基因,可编码一个由488氨基酸(amino acid,aa)、分子量约为65 kDa的磷酸化蛋白[16】,属于病毒颗粒皮层(Tegument) 中的一个蛋白。已有研究表明UL42蛋白在细胞培养或小鼠模型中是HSV-1病毒复 制和生长所必需的07],在复制的过程中与HSV-1的DNA聚合酶UL30有...