1.系统平衡:使用与样品稀释相同的缓冲液,平衡SEC-HPLC系统,直到基线稳定。 2.加载样品:通过自动进样器或手动方式,将准备好的样品加载到色谱系统中。 3.洗脱和检测:以恒定的流速通过色谱柱,蛋白质将根据其大小依次洗脱,并通过检测器(通常为紫外检测器)记录洗脱曲线。 六、HPLC纯度检测注意事项(SEC-HPLC) 1.色谱...
高效SEC-HPLC具有许多优势，包括分离效果好、操作简便、快速可靠、对蛋白质结构无破坏、适用于复杂样品等。与传统的SDS-PAGE和比色法相比，高效SEC-HPLC可以提供更准确和可重复的蛋白质纯度结果。4.高效SEC-HPLC方法的优化与改进 为了进一步提高高效SEC-HPLC方法的准确性和灵敏度，可以考虑以下因素：优化柱选取和流动相...
一、SEC分析方法的转换 USP对影响分离的因素,如色谱柱内径(dc)、长度(L)、填料内径(dp)、流速(Fc)等参数做出了更改,不仅以短柱确保了不低于原有检测法的分离性能,还实现了缩短时间、节省溶剂的优势。将与USP(L59)对应的色谱柱TSKgel G3000SWXL(5μm,HPLC)色谱柱转换为TSKgel UP-SW3000-LS(2μm,UHPLC)...
SEC-HPLC进行蛋白纯度分析时出现蛋白粘柱子是因为蛋白与柱填料发生了可逆或不可逆的相互作用，导致峰展宽...
一、SEC分析方法的转换 USP对影响分离的因素,如色谱柱内径(dc)、长度(L)、填料内径(dp)、流速(Fc)等参数做出了更改,不仅以短柱确保了不低于原有检测法的分离性能,还实现了缩短时间、节省溶剂的优势。将与USP(L59)对应的色谱柱TSKgel G3000SWXL(5μm,HPLC)色谱柱转换为TSKgel UP-SW3000-LS(2 μm,UHPLC...
当我们需要确定蛋白质样品的纯度时,一种常用的方法是使用尺寸排阻色谱(Size Exclusion Chromatography,SEC)结合高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)进行检测。以下是关于如何进行SEC-HPLC检测蛋白纯度的详细解答: 1.原理: SEC-HPLC是一种基于蛋白质分子大小的分离技术。它利用一个多孔的凝胶柱,较大...
高效液相色谱(HPLC)是一种进行物质分离、鉴定和定量的分析方法。与其它通常采用梯度模式的各种生物聚合物HPLC(离子交换、疏水相互作用和反相色谱)不同,SEC(尺寸排阻色谱法)通常采用等度方法。 尺寸排阻色谱法 尺寸排阻色谱法(SEC)包括凝胶渗透色谱法(GPC)和凝胶过滤色谱法(在含水条件下实行的一种特殊SEC法),是利用球...
三、高效SEC-HPLC方法的优势 高效SEC-HPLC具有许多优势,包括分离效果好、操作简便、快速可靠、对蛋白质结构无破坏、适用于复杂样品等。与传统的SDS-PAGE和比色法相比,高效SEC-HPLC可以提供更准确和可重复的蛋白质纯度结果。 四、高效SEC-HPLC方法的优化与改进 ...
高效SEC-HPLC具有许多优势,包括分离效果好、操作简便、快速可靠、对蛋白质结构无破坏、适用于复杂样品等。与传统的SDS-PAGE和比色法相比,高效SEC-HPLC可以提供更准确和可重复的蛋白质纯度结果。 4.高效SEC-HPLC方法的优化与改进 为了进一步提高高效SEC-HPLC方法的准确性和灵敏度,可以考虑以下因素:优化柱选取和流动相...
体积排阻色谱(Size Exclusion Chromatography,以下简称 SEC)色谱柱是监测单克隆抗体聚合体的理想选择。 SEC 是进行蛋白质分析的常规方法,SEC 色谱柱通常用于评估蛋白质的聚合谱图。蛋白质聚合体是降解产物,必须严格监测,并保持在可接受范围内。这是单克隆抗体(monoclonal anti...