合成DNA的HPLC级纯化流程设计方案一、前言合成寡核苷酸有着广泛的应用,包括用作杂交探针、DNA和RNA序列测定的引物、cDNA和基因组DNA克隆的分离、定点突变、合成DNA和RNA结构的晶体学和生物物理学研究,以及反义和反基因药物的潜在治疗。寡核苷酸合成是一种重复性技术,在固体载体上的合成优于溶液或缩聚合成方法。化学合成...
本发明公开了一种长链DNA引物的HPLC纯化改进的方法,包括如下步骤:第一步,在全自动DNA合成仪上合成DNA引物,自动脱去单体上的第一个碱基5'OH基团上的DMTr保护基;第二步,注入离子交换高效液相色谱系统进行粗检测;第三步,去除杂质短链DNA;第四步,脱除亚磷酰胺单体;第五步,进一步纯化处理;第六步,纯度检测.本发明通过...
测序时DNA在溶液中的浓度最好大于100ng/微升.如果提供10微升样品测序的话,也就是需要1微克的DNA.是要做个克隆.结果一 题目 如果只有得到的样品中DNA的量很少(DNA是100bp的),拿去测序会有结果吗?HPLC能探测到量很少的DNA吗?DNA有带荧光标记.经HPLC纯化后直接拿去测序可以吗?要测序的话至少要多少的量呢?引物序...
自1980年以来,自动化固相DNA合成机器已经问世,具有更高的耦合效率和多链合成能力。纯化寡核苷酸则为了分离出粗合成的寡核苷酸中其他不需要的组分。分离和提纯寡核苷酸的方法主要有HPLC、PAGE聚丙酰胺凝胶电泳和OPC寡核苷酸纯化柱。HPLC是多种寡核苷酸和多种物质的常用分离方法。PAGE纯化的方法简单,成本低,不需要复杂的...
自1980年以来,自动化固相DNA合成机器已经问世,具有更高的耦合效率和多链合成能力。纯化寡核苷酸则为了分离出粗合成的寡核苷酸中其他不需要的组分。分离和提纯寡核苷酸的方法主要有HPLC、PAGE聚丙酰胺凝胶电泳和OPC寡核苷酸纯化柱。HPLC是多种寡核苷酸和多种物质的常用分离方法。PAGE纯化的方法简单,成本低,不需要复杂的...
五、纯化原理 离子交换HPLC纯化原理:依据分子(DNA)所带负电荷的多少,利用梯度洗脱(分辨N-1能力非常强),将目的序列与失败序列分离开。 逆向HPLC纯化原理:根据被分离物质疏水性的不同,将不同长度或者带有修饰和不带修饰的oligo分离。 C18柱脱盐原理:此原理与逆向HPLC纯化原理相同。 六、注意事项 (一)前处理: 1.60...
摘要 本发明公开了一种长链DNA引物的HPLC纯化改进的方法,包括如下步骤第一步、在全自动DNA合成仪上合成DNA引物,自动脱去单体上的第一个碱基5’‑OH基团上的DMTr保护基;第二步、注入离子交换高效液相色谱系统进行粗检测;第三步、去除杂质短链DNA;第四步、脱除亚磷酰胺单体;第五步、进一步纯化处理;第六步、纯度检...
本发明公开了一种长链DNA引物的HPLC纯化改进的方法,包括如下步骤:第一步、在全自动DNA合成仪上合成DNA引物,自动脱去单体上的第一个碱基5’‑OH基团上的DMTr保护基;第二步、注入离子交换高效液相色谱系统进行粗检测;第三步、去除杂质短链DNA;第四步、脱除亚磷酰胺单体;第五步、进一步纯化处理;第六步、纯度检测。
公开号：CN110066789A 公开日：20190730 专利内容由知识产权出版社提供 摘要：本发明公开了一种长链DNA引物的HPLC纯化改进的方法，包括如下步骤：第一步、在全自动DNA合成仪上合成DNA引物，自动脱去单体上的第一个碱基5’‑OH基团上的DMTr保护基；第二步、注入离子交换高效液相色谱系统进行粗检测；第三步、去除杂质...