原因:主要是因为蛋白和柱子结合能力不足导致的,也可能是目的蛋白无His-tag序列或者结合条件不对导致。 (1)His标签没有充分暴露:在蛋白中加入适量的尿素或盐酸胍等变性剂,若可以挂柱则尝试在变性条件下纯化,如果不能接受蛋白变性纯化,那可以在上游分子水平改变His的长度或位置,让His暴露在蛋白表面。 (2)His标签是否...
His-tag是蛋白质重组技术中经常用到的一种标签,其序列为6个组氨酸HHHHHH,其特点是分子量小,只有不到0.84 KD,基本不改变蛋白质的生物结构,不改变蛋白质的溶解性,更重要的是它使蛋白质的纯化变得极为方便。根据组氨酸上的咪唑环可以与二价金属离子结合的原理,His-Tag 可结合在目的蛋白的 C 末端或 N 末端,形成...
His-Tag是一段由6个组氨酸残基(His)组成的多肽序列。His-Tag可以在目标蛋白质的N端、C端或内部位置插入,使得目标蛋白与His-Tag融为一体。His-Tag具有亲和力,可以与金属离子(如Ni2+、Co2+)发生配位作用,形成稳定的His-Tag-金属离子络合物。通过His-Tag与金属离子之间的相互作用,可以实现对目标蛋白的快速纯化和鉴定...
高序列兼容性:N-端的His-tag与细菌的转录翻译机制兼容,有利于蛋白表达; 小序列影响小:His-tag非常小,His-tag对目的蛋白本身特性几乎没有影响,不会改变目的蛋白本身的可溶性和生物学功能;且在融合蛋白结晶后对蛋白的结构没有影响; 免疫原性低:His-tag的免疫原性相对较低,可将纯化的蛋白直接注射入动物体内进行免疫...
His-Tag是短肽序列,通常由六个组氨酸残基组成,与重组蛋白融合。His-Tag使得利用固定金属亲和层析(IMAC)特异而高效地纯化蛋白质成为可能,其中His-Tag与固定在固体支持上的金属离子(如镍或钴)结合。这种技术能够快速高产地纯化His-Tag重组蛋白,便于后续的结构研究、酶活性测定和蛋白质相互作用分析等应用。
His标签是最简单、使用最广泛的纯化标签之一,组氨酸残基易与过渡金属离子配位如固定在珠子或树脂上的Ni2+或Co2+,用于纯化。重组蛋白纯化的多聚组氨酸系统已成功用于各种表达系统,包括细菌、酵母细胞、植物细胞和哺乳动物细胞系统。 His标签序列及大小 His标签(又称多组氨酸标签),由6到10个连续的组氨酸残基组成。最常用...
一、6xHis Tag 6xHis是指六个组氨酸残基组成的融合标签,可插入在目的蛋白的C末端或N末端。组氨酸残基侧链与固态的镍有强烈的吸引力,可用于固定化金属螯合层析(IMAC),对重组蛋白进行分离纯化。 序列:CATCACCATCACCATCAC 6xHis标签特点: 1.标签的分子量小,只有~0.84KD,一般不影响目标...
聚组氨酸标记多肽是一种将多肽序列末端添加聚组氨酸（polyhistidine）标签的方法。这种标签通常由六个连续的组氨酸残基构成，因此也被称为His-tag。聚组氨酸标记多肽在生物技术和生物医学研究中被广泛应用，并具有以下优势：1. 亲和纯化：聚组氨酸标记多肽可以与金属离子亲和剂（如镍或钴）结合，实现对蛋白质的亲和纯化。
在基因工程实验中，将组氨酸标签（His-tag）设计到引物的5'端，能够使后续的蛋白质表达和纯化过程更加便捷。具体操作时，通常选择组氨酸的密码子序列（如CAU、CAC），将其插入到引物的5'端。这样，在进行PCR扩增时，His-tag会一同被引入目标基因序列中。PCR扩增后，通过限制性内切酶切割，可以进一步引入...
HIS TAG®单克隆抗体是针对许多NOVAGEN®表达载体以及许多其他市售载体编码的HIS TAG®序列的小鼠单克隆抗体(IgG1)。该抗体可识别5个连续的组氨酸残基,与周围的氨基酸环境无关。高亲和力(Kd= 5 × 10-8至1 × 10-9M)可以在0.1-0.2 g/ml的抗体浓度下灵敏、特异性地检测HIS TAG®融合蛋白。HIS TAG®...