His tag基因序列通常由多个组氨酸密码子串联构成。一般常见的His tag长度有6个、8个等不同组氨酸数量。6xHis tag是应用最为广泛的一种His tag形式。His tag基因序列能被准确设计并整合到目标基因下游。该序列可通过基因克隆技术插入到表达载体中。在大肠杆菌表达系统里His tag基因序列常被使用。利用His tag基因序列...
原因:主要是因为蛋白和柱子结合能力不足导致的,也可能是目的蛋白无His-tag序列或者结合条件不对导致。 (1)His标签没有充分暴露:在蛋白中加入适量的尿素或盐酸胍等变性剂,若可以挂柱则尝试在变性条件下纯化,如果不能接受蛋白变性纯化,那可以在上游分子水平改变His的长度或位置,让His暴露在蛋白表面。 (2)His标签是否...
序列：典型序列为HHHHHH（6×His），可根据需求延长至10×His。位置：通常位于蛋白的N端或C端，避免嵌入蛋白内部影响结合效率。灵活性：可与其他标签（如FLAG、HA）组合使用（如His-FLAG），提高功能多样性。3. 作用机制 金属螯合层析（IMAC）：结合：His Tag与镍柱（Ni-NTA）或钴柱上的金属离子结合，滞留目标蛋...
1. 基本概念与结构 定义：由6-10个连续组氨酸（His）组成的短肽序列（如HHHHHH），通常添加在重组蛋白的N端或C端。作用原理：组氨酸的咪唑基团在生理pH下带正电，可与二价金属离子（如Ni²⁺、Co²⁺）螯合，实现蛋白分离或固定。2. 核心应用场景 蛋白纯化：金属螯合层析（IMAC）：将含His Tag的蛋白混...
His-Tag是短肽序列,通常由六个组氨酸残基组成,与重组蛋白融合。His-Tag使得利用固定金属亲和层析(IMAC)特异而高效地纯化蛋白质成为可能,其中His-Tag与固定在固体支持上的金属离子(如镍或钴)结合。这种技术能够快速高产地纯化His-Tag重组蛋白,便于后续的结构研究、酶活性测定和蛋白质相互作用分析等应用。
His-Tag是一段由6个组氨酸残基(His)组成的多肽序列。His-Tag可以在目标蛋白质的N端、C端或内部位置插入,使得目标蛋白与His-Tag融为一体。His-Tag具有亲和力,可以与金属离子(如Ni2+、Co2+)发生配位作用,形成稳定的His-Tag-金属离子络合物。通过His-Tag与金属离子之间的相互作用,可以实现对目标蛋白的快速纯化和鉴定...
聚组氨酸标记多肽是一种将多肽序列末端添加聚组氨酸（polyhistidine）标签的方法。这种标签通常由六个连续的组氨酸残基构成，因此也被称为His-tag。聚组氨酸标记多肽在生物技术和生物医学研究中被广泛应用，并具有以下优势：1. 亲和纯化：聚组氨酸标记多肽可以与金属离子亲和剂（如镍或钴）结合，实现对蛋白质的亲和纯化。
His标签是最简单、使用最广泛的纯化标签之一,组氨酸残基易与过渡金属离子配位如固定在珠子或树脂上的Ni2+或Co2+,用于纯化。重组蛋白纯化的多聚组氨酸系统已成功用于各种表达系统,包括细菌、酵母细胞、植物细胞和哺乳动物细胞系统。 His标签序列及大小 His标签(又称多组氨酸标签),由6到10个连续的组氨酸残基组成。最常用...
在基因工程实验中，将组氨酸标签（His-tag）设计到引物的5'端，能够使后续的蛋白质表达和纯化过程更加便捷。具体操作时，通常选择组氨酸的密码子序列（如CAU、CAC），将其插入到引物的5'端。这样，在进行PCR扩增时，His-tag会一同被引入目标基因序列中。PCR扩增后，通过限制性内切酶切割，可以进一步引入...
His-tag是蛋白质重组技术中经常用到的一种标签,其序列为6个组氨酸HHHHHH,其特点是分子量小,只有不到0.84 KD,基本不改变蛋白质的生物结构,不改变蛋白质的溶解性,更重要的是它使蛋白质的纯化变得极为方便。根据组氨酸上的咪唑环可以与二价金属离子结合的原理,His-Tag...