应用案例-使用HiScreen Ni FF纯化带有His标签的绿色荧光蛋白 材料与方法:本实验中,使用HiScreen Ni FF层析柱(预装有FF填料)纯化带有(His)6标签的绿色荧光蛋白GFP-(His)6,蛋白由大肠杆菌表达,粗样品共计40 mL。 实验结果:层析结果如下图所示。通过咪唑溶液线性梯度洗脱,在490 nm波长下,检测到洗脱峰,证明目的蛋白...
本实验将以His-GFP(绿色荧光蛋白)为例,阐述His-tag蛋白的纯化过程。 1.E. coli重组菌体破碎 表达完成的E. coli重组菌体,经超声或细胞破碎仪进行破碎。当需要破碎的细胞沉淀较少(<1 g)时,通常在Eppendorf管中,用超声法完成细胞裂解。而当细胞沉淀较多时,可选用细胞破碎仪进行破碎。本实验采用细胞破碎仪法。
蛋白gfp纯化步骤缓冲液非特异imidazole 以His-GFP为例简述His-tag蛋白的纯化His-tag是重组蛋白中最常用的融合标签之一。使用镍柱纯化His-tag融合蛋白的原理为:组氨酸的咪唑侧链可亲和结合镍、锌和钴等金属离子,在中性和弱碱性条件下带组氨酸标签的目的蛋白与镍柱结合,在低pH下用咪唑竞争洗脱。实验中一般选用6个组氨酸(...
以His-GFP为例简述His-tag蛋白的纯化His-GFP蛋白的纯化步骤以His-GFP为例简述His-tag蛋白的纯化His-tag是重组蛋白中最常用的融合标签之一。使用镍柱纯化His-tag融合蛋白的原理为:组氨酸的咪唑侧链可亲和结合镍、锌和钴等金属离子,在中性和弱碱性条件下带组氨酸标签的目的蛋白与镍柱结合,在低pH下用咪唑竞争洗脱。实验...
1、以His-GFP为例简述His-tag蛋白的纯化His-tag是重组蛋白中最常用的融合标签之一。使用镍柱纯化His-tag融合蛋白的原理为:组氨酸的咪唑侧链可亲和结合镍、锌和钴等金属离子,在中性和弱碱性条件下带组氨酸标签的目的蛋白与镍柱结合,在低pH下用咪唑竞争洗脱。实验中一般选用6个组氨酸(His6-tag)的标签。His6标签有许...
GFP/eGFP/eCFP/eYFP/mCherry标签 GFP和荧光团的带状表示 GFP蛋白是由238个氨基酸组成的多肽链构成,亚基分子量约为27kDa,野生型绿色荧光蛋白在395nm处有最大光吸收,能够吸收蓝光,当受到紫外线或者钙离子激活时,能够发出绿色荧光,最大发射峰为509nm。 GFP荧光蛋白的生色团的形成是没有物种特异性的,是不需要任何外...
常用的标签包括GFP、HA、Flag、His、GST等。其中绿色萤光蛋白(Green Fluorescent Protein),简称GFP,这种蛋白质zui早是由下村脩等人在1962年在一种学名Aequorea victoria的水母中发现。其基因所产生的蛋白质,在蓝色波长范围的光线激发下,会发出绿色萤光。
mCherry是从DsRed演化来的性能最好的一个单体红色荧光蛋白,可以和GFP系列荧光蛋白共用,实现多色标记体内、外实验表明,mCherry在N端和C端融合外源蛋白时,荧光蛋白活性和被融合的目标蛋白功能相互没有明显影响。这些荧光标签蛋白,其融合表达目的蛋白后具有以下优点:...
用 0.5 mL 结合缓冲液稀释三种蛋白质(6xHis 标签 BirA、6xHis 标签红色萤火虫荧光素酶或 6xHis 标签 GFP)的样本 (0.5 mL),并用 25 mL 沉淀微珠进行手动纯化。有关缓冲液成分和体积,遵循各自供应商的实验方案。Pierce Ni-NTA 磁性琼脂糖的得率更...
(1) GST标签:是谷胱甘肽S-转移酶,具体蛋白表达产率高,表达产物易于纯化、可溶等特性,常用于pull-down。(2) HA标签:源于人类流感血凝素的99-106位氨基酸序列,HA标签具有较强的免疫原性,在蛋白分离纯化,检测示踪中应用较多,HA标签抗体能特异识别C末端或N末端带有HA标签(HA-tagged)的融合蛋白.(3) GFP:...