本实验将以His-GFP(绿色荧光蛋白)为例,阐述His-tag蛋白的纯化过程。 1.E. coli重组菌体破碎 表达完成的E. coli重组菌体,经超声或细胞破碎仪进行破碎。当需要破碎的细胞沉淀较少(<1 g)时,通常在Eppendorf管中,用超声法完成细胞裂解。而当细胞沉淀较多时,可选用细胞破碎仪进行破碎。本实验采用细胞破碎仪法。
1、以His-GFP为例简述His-tag蛋白的纯化His-tag是重组蛋白中最常用的融合标签之一。使用镍柱纯化His-tag融合蛋白的原理为:组氨酸的咪唑侧链可亲和结合镍、锌和钴等金属离子,在中性和弱碱性条件下带组氨酸标签的目的蛋白与镍柱结合,在低pH下用咪唑竞争洗脱。实验中一般选用6个组氨酸(His6-tag)的标签。His6标签有...
应用案例-使用HiScreen Ni FF纯化带有His标签的绿色荧光蛋白 材料与方法:本实验中,使用HiScreen Ni FF层析柱(预装有FF填料)纯化带有(His)6标签的绿色荧光蛋白GFP-(His)6,蛋白由大肠杆菌表达,粗样品共计40 mL。 实验结果:层析结果如下图所示。通过咪唑溶液线性梯度洗脱,在490 nm波长下,检测到洗脱峰,证明目的蛋白...
本实验将以His-GFP(绿色荧光蛋白)为例,阐述His-tag蛋白的纯化过程。 E.coli重组菌体破碎 表达完成的E.coli重组菌体,经超声或细胞破碎仪进行破碎。当需要破碎的细胞沉淀较少(v1g)时,通常在Eppendof管中,用超声法完成细胞裂解。而当细胞沉淀较多时,可选用细胞破碎仪进行破碎。本实验采用细胞破碎仪法。
以His-GFP为例简述His-tag蛋白的纯化His-GFP蛋白的纯化步骤以His-GFP为例简述His-tag蛋白的纯化His-tag是重组蛋白中最常用的融合标签之一。使用镍柱纯化His-tag融合蛋白的原理为:组氨酸的咪唑侧链可亲和结合镍、锌和钴等金属离子,在中性和弱碱性条件下带组氨酸标签的目的蛋白与镍柱结合,在低pH下用咪唑竞争洗脱。实验...
产品活性:绿色荧光蛋白 (GFP) 是一种在蓝紫光范围内曝光时会发出绿色荧光的蛋白质,发现于包括 Aequorea victoria,珊瑚,海葵,浮游动物,桡足类和文昌鱼在内的生物中。GFP 蛋白 (Aequorea victoria) 的主要激发峰波长在 395 nm ,次要激发峰波长在 475 nm,而其发射峰波长在 509 nm,位于可见光谱的较低绿色部分。GF...
高产量、高纯度、中等规模纯化 6xHisTagged 蛋白。使用含 HisPur Ni-NTA Superflow 琼脂糖的 200 mL色谱柱在 3 小时内纯化 4 克以上的过表达 6xHis-GFP蛋白。以 20 mL/min 的流速上样一升裂解物,然后用含 30 mM 咪唑的洗涤缓...
用 0.5 mL 结合缓冲液稀释三种蛋白质(6xHis 标签 BirA、6xHis 标签红色萤火虫荧光素酶或 6xHis 标签 GFP)的样本 (0.5 mL),并用 25 mL 沉淀微珠进行手动纯化。有关缓冲液成分和体积,遵循各自供应商的实验方案。Pierce Ni-NTA 磁性琼脂糖的得率更高...
GFP抗体-抗GFP标签抗体 绿色萤光蛋白(Green Fluorescent Protein,简称GFP),早在1962年在水母中发现。其基因所产生的蛋白质,在蓝色波长范围的光线激发下,会发出绿色萤光。GFP或其突变体EGFP等被广泛用于基因表达效率的检测,以及和目的蛋白融合表达用于检测目的蛋白的表达和分布。一般来说,GFP抗体不仅可以检测GFP或其适当...
标签切除:若需天然蛋白(如结构解析),需在标签与目标蛋白间插入蛋白酶切位点(如TEV、Thrombin)。��选择原则 His标签:经济高效,适合大规模纯化。Strep标签:高特异性,但介质成本较高。 荧光标签(GFP/RFP):实时追踪,无需破坏样本。蛋白标签在科研中就像给蛋白装上了 “小导航”,让我们能更精准地研究它们。