慢性HCV感染者的诊断依据是病原学检测。抗-HCV阳性提示HCV感染,但是否是现症感染,还需要进一步检测HCV RNA。越来越多的研究提示应采用灵敏度高、精确度好、线性范围宽的基于PCR扩增的方法来进行HCV RNA定量(用IU/mL表示)非常重要。高精度的HCV RNA检测可以准确地判断HCV现症感染、评估抗病毒治疗前基线病毒载量、以...
利用Amplicor检测(如下)进行PCR分析。 血清或单核细胞HCV的扩增子检测HCV RNA检测是利用来自HCV的5’非翻译区的单引物对(经生物素化的下游引物)所进行的原型PCR检测。加入尿嘧啶-N-糖基化酶,以防止扩增子污染。将HCV靶RNA在存在Mn++的情况下反转录并用rTth DNA聚合酶用单一试管反应扩增。扩增之后,将该产物经碱...
基于QRR-PCR的HCV复制子测定为测定化合物的抗病毒效果,在补充了2%FBS和0.5%DMSO的DMEM中用系列稀释的化合物对HCV复制子细胞克隆A进行48h处理,然后提取胞内总RNA,并使用HCV特异性引物(5’-TCT TCA CGC AGA AAG CGT CTA-3’和5’-CTGGCA ATT CCG GTG TAC T-3’(Seq Id No.1)以及探针(5’-6-FAM-TCCT...
HCV有9.5kb的正义、单链RNA基因组且是黄病毒家族的成员。在系统发生分析的基础上鉴定了至少六个不同但相关HCV基因型(Simmonds等,J.Gen.Virol.(1993)74:2391-2399)。病毒编码具有超过3000个氨基酸残基的单个多蛋白(Choo等,Sciencel.(1989)244:359-362;Choo等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA.(1991)88:2451-2455;Han...
2.7. Quantitative RT-PCR (RT-qPCR) Purification of the total RNA and reverse transcription was carried out as described previously [15]. The resulting cDNA was subjected to quantitative PCR (qPCR) on an iQ5 Real-Time PCR Detection System (Bio-Rad, Hercules, CA, USA). Human NOX1, NOX4,...