GST标签蛋白亲和纯化,其配基通常是GST的底物谷胱甘肽(GSH),通过酶与底物的特异性结合来实现GST蛋白的分离纯化。其原理是:在固相基质上通过巯基结合一个谷胱甘肽,然后利用谷胱甘肽与谷胱甘肽巯基转移酶之间的特异性作用力,使得带GST标签的融合蛋白与基质上的谷胱甘肽结合,达到分离纯化的目的。 图2 固相基质与配基GSH偶联实现...
GST标签是一种融合标签,通常位于蛋白质的N端或C端。GST标签是由谷氨酰转移酶(Glutathione S-transferase)的氨基酸序列衍生而来,该酶在细胞内具有高度保守性,因此GST标签在不同物种中都有很好的应用效果。 GST标签的氨基酸序列通常包括三个部分:N端部分、核心部分和C端部分。N端部分通常是GST标签的前10-20个氨基酸,...
如果GST标签需要切除,包含 PreScission™ 蛋白酶识别位点、Thrombin识别位点或Factor Xa识别位点的标签蛋白可以在与GSTrap预装柱结合时或在洗脱后进行标签去除。 一般来说,柱上酶切是推荐的方法,因为许多潜在的杂质都能被洗掉,目的蛋白洗脱时具有更高的纯度。如果切割条件需要优化,建议在洗脱后进行标签去除。 以下GST标...
GST融合蛋白纯化磁珠(Magarose-GSH)具有高效、快速、方便等特点,是公司针对纯化 GST 标签融合蛋白而研制的一种新型纯化介质,可通过磁性分离方式直接从生物样品中一步获得高纯度的目标蛋白,极大地简化纯化工艺和提高纯化效率,适合科研和工业领域便捷地进行 GST 融合蛋白的纯化。使用Magarose-GSH磁珠进行 GST Pull-down ...
GST标签是一种亲和标签，能特异的与谷胱甘肽结合，表现为酶和底物的作用原理，利用这个原理将GST做成标签表达出融合蛋白，与带谷胱甘肽的亲和介质特异性结合纯化出目的蛋白，再用特异性的酶将GST标签切除，从而得到天然蛋白。GST融合蛋白纯化具有纯度高、纯化条件温和、蛋白活性不受影响以及促进蛋白的可溶性表达等优势。因此...
Fig.1 GST标签蛋白的晶体结构 GST标签蛋白纯化原理 在设计时,用于GST标签蛋白纯化的亲和填料利用了谷胱甘肽的结构和GST(谷胱甘肽S-转移酶)的结合位点互补的特点,通过将谷胱甘肽SH基团与琼脂糖介质上的预活化基团偶联,形成特异性的亲和填料。 在纯化过程中,带有GST标签的目标蛋白与琼脂糖介质上交联的谷胱甘肽配体发生互补...
GST标签纯化蛋白常见问题解析: 问题一:GST 融合蛋白的产量低或无法检测到 1、原因:融合蛋白形成包涵体 解决方案: ①采用低温(16∽25℃)培养细胞,或者诱导过程中降低诱导剂的终浓度至1mM,或者缩短诱导时间。 ②纯化前需要完全融解和复性。将裂解液与GST标签蛋白纯化琼脂糖凝胶在摇床上轻摇2个小时或者更长时间(过夜)...
什么是GST标签? 目前有多种用于蛋白纯化的亲和标签,而GST标签就是其中之一。GST是谷胱甘肽巯基转移酶的简称,指的是整个蛋白质,而不是像Rho1D4标签仅指几个氨基酸。自20世纪80年代末GST标签就开始用于蛋白质纯化(Smith & Johnson 1988),并被确立为需要极高纯度的蛋白质纯化试验的可靠方法(Harper & Speicher 2013)...
GST标签的去除方法有柱上酶切和洗脱后酶切两种。推荐柱上酶切，因为它能有效去除杂质，使目的蛋白具有更高的纯度。使用PreScission™、Thrombin或Factor Xa蛋白酶进行切割，需注意酶的使用条件和缓冲液选择。PreScission蛋白酶在4度下使用，Thrombin凝血酶在室温下孵育，Factor Xa在22-25℃下操作。酶...
GST标签的蛋白纯化westernblot未显示有条带丽春红染色有明显条带推测使用的gst抗体不能与目的条带特异性结合 GST标签的蛋白纯化 GST标签的蛋白纯化 1.200mL菌液离心所得的菌体用80mL 1×PBS 重悬,置于冰上超声10min(超声5s,停10s)。 2.超声所得产物留样1mL,剩余样品4℃,12000rpm离心30min。 3.收集上清,用...