1、采用我司已被授权的国际PCT专利技术（专利号：US 10,144,936 B2）来进行载体的构建，且该组装为无缝组装；2、载体资源丰富，同时支持个性化定制载体；3、实验结果可靠、图片美观；4、可与我司GST pull-down实验进行衔接，整个实验可以畅通且快速地完成。实验周期 5-10个工作日 样品接收标准 客户下单及项目信息...
①构建表达载体：目的基因克隆或目的基因合成；限制性内切酶酶切骨架载体并纯化；目的基因插入骨架载体；转化大肠杆菌，筛选阳性克隆并测序鉴定； ②转化表达菌株：将目的表达载体转化表达菌株； ③制备目的蛋白：诱导目的蛋白表达并提取目的蛋白； ④GST-pull down实验； ⑤Western Blot检测目的蛋...
1.构建诱饵蛋白表达载体、蛋白表达和磁珠结合 2. 将磁珠结合的诱饵蛋白与总蛋白pull-down 3. WB验证 五、GST pull-down与区别及优缺点 GST pull-down 是两种蛋白在试管内(细胞以外)发生生化反应互作的结果,只要互作蛋白间具有相互结合的结构域基础即可,验证蛋白之间直接的相互作用。 Co-IP 实验是细胞内高表达目的...
在蛋白质相互作用研究中,GST Pull-Down是一种常用的体外实验方法,主要用于验证已知蛋白质之间的直接相互作用。与免疫共沉淀(Co-IP)相比,GST Pull-Down具有实验流程简单、操作难度低等优点,但其在非生理状态下的测试可能会影响蛋白质的结构和功能。尽管如此,GST Pull-Down在蛋白质相互作用的初筛和验证中仍具有重要价...
一、实验目的:构建GST-P53融合表达载体,并过表达此蛋白。通过GST-pull down 沉淀细胞中与P53蛋白互作的其他蛋白,并通过WB鉴定P53与HSP70是否互作。 二、实验材料 l 主要试剂 l 主要仪器及器材 三、 实验方法 1、 捕获蛋白制备 1) 收集的细胞中加入1mL 预冷的PBS; 吹打混匀后,1500g 离心 5 min,去除上清,再...
原核表达载体构建:这是实验的第一步,通过构建含有GST标签的原核表达载体,为后续的实验打下基础。 原核表达:将构建好的载体导入原核细胞中进行表达,获得GST融合蛋白。 蛋白纯化:利用亲和层析法,将GST融合蛋白从细胞裂解液中纯化出来。 Pull-down:将纯化得到的GST融合蛋白与细胞裂解液混合,通过GST标签捕获与之相互作用...
了解完原理之后,我们再来看一下GST Pull-Down的实验步骤: 蛋白质表达与纯化 · 构建表达载体:将目标蛋白的编码序列克隆到含有GST标签的表达载体(如pGEX系列质粒)中. · 大肠杆菌转化与蛋白表达:将构建好的表达载体转化到大肠杆菌宿主细胞中,使用IPTG诱导GST融合蛋白的表达. ...
GST-pull down 技术是一种在体外验证蛋白质相互作用的试验技术,可用来进一步验证酵母双杂交的结果。将靶蛋白与 GST(谷胱苷肽巯基转移酶, Glutathione-Stransferase)融合,使其与谷胱甘肽亲和树脂结合,然后在目的蛋白溶液过柱时,便可从中捕获与靶蛋白相互作用的目的蛋白,洗脱结合物后通过western blot分析,即可证实两种蛋白...
GST-诱饵蛋白原核表达载体构建/His-猎物蛋白原核表达载体构建—原核表达—蛋白纯化—Pull-down捕获猎物蛋白—SDS-PAGE电泳—Western blot或LC-MS/MS 服务内容及说明 适用场景 1、用于验证两个已知蛋白的相互作用；2、筛选与已知蛋白相互作用的未知蛋白。实验周期 拉下实验（Pull-down）的优点 1、鉴定的蛋白是直接作用...
影响GST pull down实验结果的因素 1、 载体选择 对于不同的实验需要构建的载体是不同的，载体的选择对融合蛋白有很大的影响，需要综合考虑表达融合蛋白的可溶性、能否被 IPTG 诱导表达、以及是否能够高质量表达。目前，经改造的pGEX 载体由于同时具备以上优点而广泛应用于构建 GST 融合蛋白。2、 诱导温度 不同温度下...