实验细胞:使用LPS诱导的BV2细胞进行实验。 GSDMD抗体:选择Abcam的ab209845。 NLRP3抗体:选择Abcam的ab263899。 跑胶操作:使用12%的BBI预制胶或雅酶12%的PAGE胶进行电泳。建议使用预制胶,效果更佳。电泳时先以60V电压运行,然后转至100V继续运行。 转膜步骤:每张膜以220mA的电流进行转膜,持续120分钟。 封闭操作:使用...
在本研究中,作者创新性的发现了细胞焦亡通过分泌带有GSDMD孔的细胞外囊泡直接向旁观者细胞传播的机制。 为了验证细胞焦亡是否能通过旁观者效应影响周围细胞,作者首先通过NLRP3激活剂nigericin刺激共培养的野生型骨髓来源巨噬细胞(WT BMDMs)和...
分别加入Caspase-1、Caspase-1 p20、NLRP3、ASC、GSDMD、β-actin一抗(1∶1 000、1∶1 000、1∶1 000、1∶1 000、1∶2 000、1∶800),4℃孵育过夜,TBST洗涤3次,每次5 min,二抗(1∶1 0000)室温孵育1 h,TBST洗涤3次,每次...
其特点是一种由 GSDM家族蛋白介导,激活 NOD 样受体蛋白 3(NLRP3)炎性体,形成细胞膜孔,释放 IL-1β 和IL-18 [3,4]。然后由促炎性Caspases通过经典和非经典炎性体信号通路裂解的GSDMD蛋白生成GSDMD-N末端结构域(GSDMD-N),再由GSDMD-N迅速插入质膜形成活性孔[5,6]。因此,GSDMD-N 充当了细胞焦亡的最终...
据报道,抑制巨噬细胞中NLRP3的激活可减少白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-18的释放,抑制炎症反应,缓解脓毒症小鼠组织损伤[6]。此外,抑制Caspase-1介导的细胞焦亡能够明显降低机体过度炎症反应,从而改善脓毒症小鼠ALI并抑制脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的肺血管内皮细胞和肺泡巨噬细胞炎症反应[7...
据报道,抑制巨噬细胞中NLRP3的激活可减少白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-18的释放,抑制炎症反应,缓解脓毒症小鼠组织损伤[6]。此外,抑制Caspase-1介导的细胞焦亡能够明显降低机体过度炎症反应,从而改善脓毒症小鼠ALI并抑制脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的肺血管内皮细胞和肺泡巨噬细胞炎症反应[7...
作者接下来检测了经 LPS 和尼日利亚菌素(LPS/Nig)处理的 BMDM 中 GSDMD 的棕榈酰化状态,LPS/Nig 是诱导 NLR 家族含吡咯啉结构域 3(NLRP3)炎性组活化和caspase-1依赖性热蛋白沉积的成熟范例。在 LPS/Nig 刺激下,GSDMD-FL 和裂解的 GSDMD-NT 都被棕榈酰化;添加 2-BP 可阻断这种效应(图 2a)。使用 2-BP ...
NaB 补充可促进 SCI 大鼠运动功能恢复,减轻病理损伤,抑制 NLRP3/Caspase-1/GSDMD 细胞焦亡通路蛋白表达,抑制神经元细胞焦亡和炎症反应,提示肠道微生物群产生的丁酸可能有效促进 SCI 恢复。不过,该研究也存在一定局限性,如缺乏细胞实验验证发生细胞焦亡的具体细胞类型,仅初步探索了 NaB 对经典细胞焦亡通路的影响,且 ...
另一方面,与这些效应并列,细胞焦亡也可以抑制肿瘤,例如,在肝细胞癌模型中,通过NLRP3炎性小体激活诱导的细胞焦亡显著抑制了肿瘤的转移和生长。 鉴于细胞焦亡的双重作用,其分子成分在不同癌症中存在差异表达。GSDMs在乳腺癌、胃癌、宫颈癌和肺癌等肿瘤中,已被证明同时作为癌基因或肿瘤抑制因子控制增殖、转移、治疗抵抗...
细胞焦亡的过程由半胱氨酸蛋白酶激活介导,伴随着NLR家族含pyrin结构域蛋白3(NLRP3)炎症小体和相关炎症因子的激活。Gasdermin D(GSDMD)是细胞焦亡的关键执行者,在胱天蛋白酶存在下发生自我裂解,释放其N末端。该N末端可以形成跨膜孔,导致细胞...