WB心得细胞焦亡相关实验中,跑GSDMD-n的一点心得体会,就是提完蛋白放四度不要冻起来直接跑,趋势就是对的。敷二抗液体可以多一点。细胞上清蛋白可以用甲醇氯仿法,屡试不爽,就是在干燥的时候不要高温,有条件可以试一下真空离心干燥,另外上清蛋 - 嘉嘉搞科研于20240729
利用Ulex europaeus凝集素I (UEA-I)对黏液进行染色,研究人员通过深层组织成像再现了GsdmdΔIEC结肠受损的黏液层,结果发现,LPS刺激WT结肠黏液生长,这种作用可被上皮GSDMD缺乏或坏死磺胺(NSA;GSDMD-N寡聚抑制物)所消除(图S4A-B),表明上皮...
人类与小鼠基因组中分别编码GSDM家族蛋白6个与10个成员，此家族在生物和病理过程中扮演着多重角色，包括细胞分化、细胞增殖、细胞死亡、线粒体稳态、抗微生物、炎症和肿瘤发生。近年来，GSDM家族成员在细胞焦亡过程中的直接作用引起研究者的极大兴趣。GSDM家族成员包含一个细胞毒性N末端结构域与一个由灵活...
其主要的功能是：当细胞受到病原相关分子模式（PAMPs）和损伤相关分子模式（DAMPs）的刺激时，细胞内的信号感受器(NLR家族，AIM2蛋白以及CARD8， PYRIN等)会诱导形成炎症小体（inflammasome）并激活下游caspase-1/4/5/8/11对GSDMD的N端切割产生p30片段进而上细胞膜成孔引发细胞焦亡和炎性因子释放【1-5】。这些功能...
caspase-1将GSDMD切割形成两个片段，N端片段聚合并插入质膜，形成内径10-20nm的孔隙【4】。第二种诱导焦亡的方法是通过小鼠caspase-11或人类caspase-4和caspase-5的作用。这些caspases的催化活性不是通过招募到炎性小体进行激活的，而是通过与细胞脂多糖（Lipopolysaccharides，LPS）相结合而激发的。与LPS结合后，活化后...
在AS发展的过程中,动脉管壁内皮损伤和脂质沉积是主要的始动因素,它分别通过Caspase-1和Caspase-11/4/5的激活对GSDMD蛋白进行切割,介导经典和非经典细胞焦亡。GSDMD蛋白的N端迁移至细胞膜上,然后寡聚化在细胞膜上形成孔道,释放炎性因子IL-1β和IL-18到细胞间质中。炎性因子的释放进一步促进了血管内皮细胞的焦亡,...
caspase-1将GSDMD切割形成两个片段,N端片段聚合并插入质膜,形成内径10-20nm的孔隙【4】。第二种诱导焦亡的方法是通过小鼠caspase-11或人类caspase-4和caspase-5的作用。这些caspases的催化活性不是通过招募到炎性小体进行激活的,而是通过与细胞脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)相结合而激发的。与LPS结合后,活化后的...
细胞焦亡(Pyroptosis)是由炎症小体和下游的效应因子gasdermin D(GSDMD)所介导的【1,2】。在被炎性小体相关半胱天冬酶(Inflammasome-associated caspases)裂解后,GSDMD的N端结构域形成促进细胞溶解的膜孔。有许多蛋白质促进GSDMD的切割,但目前尚不清楚哪种蛋白质是GSDMD分裂后形成膜孔所必需的。
GSDMD-介导细胞焦亡的关键蛋白 GSDMD,又称GSDMDC1或DFNA5L,是一种主要表达于免疫细胞和小肠黏膜上皮细胞表面,由242个氨基酸组成的蛋白[7]。 GSDMD具有两个保守的结构域:N-末端效应结构域和C-末端抑制结构域,N端为主要的功能结构域,参与细胞焦亡的发生,而C末端具有自体抑制的功能[8]。在GSDMD未活化的状态下,C端...
在GSDMD未活化的状态下,C端和N端结构域相结合,抑制N末端结构域的质膜成孔功能[8]。在外界信号刺激下,细胞焦亡通路中被激活的Caspase-1/4/5/11对GSDMD蛋白进行切割,切割后的GSDMD被分成N端和C端两个独立的结构域片段。其中GSDMD-N端结构域能靶向细胞膜,与细胞膜上的磷脂蛋白结合,发生多聚化并在细胞质膜上...