棕榈酰化酶ZDHHC5和ZDHHC9催化Cys/Cys(人/小鼠)位点的S-棕榈酰化,并且在活性氧(ROS)的促进下,直接介导GSDMD N端结构域(GSDMD-NT)的膜转位,但不影响全长GSDMD(GSDMD-FL)的膜转位。刺激物如脂多糖(LPS)可在炎症体激活前诱导GSDMD-FL的棕榈酰化,因此成为巨噬细胞激活的必要分子事件。结果表明抑制GSDMD棕榈酰化可...
同时作者还观察到,在二氧化硅或LPS +二氧化硅处理后,PI阳性细胞随着时间的推移而增加,这表明细胞活力下降,膜完整性丧失(图2D)。为了检测细胞焦亡是否激活,作者测量了全长(GSDMDFL)和裂解的 (GSDMDNT)的蛋白水平,因为GSDMDNT介导焦亡相关的...
CASA 结果显示,Gsdmdfl/fl Cx3cr1-cre 小鼠的精子质量有所改善(图 3E、F)。此外,促炎细胞因子和趋化因子在 Gsdmdfl/fl Cx3cr1-cre 小鼠睾丸中的表达明显减少(图 4A,B)。接着,作者用流式细胞术分析了经 UPEC 处理的小鼠睾丸中的免疫细胞群,观察到 Gsdmdfl/fl Cx3cr1-cre 小鼠睾丸中免疫细胞(CD45+)...
因此,GSDMD-NT 线粒体结合和功能障碍先于质膜通透。为了证实 GSDMD-NT 与线粒体的共定位,作者在 HEK293T 中表达了 FLAG 标记的 GSDMD-FL 或 -NT。转染 18 h 后,当表达 GSDMD-NT 的细胞中有 30% 死亡时,通过共聚焦显微镜(图 3C)、结构照明显微镜(SIM)(图 3D)和免疫-EM(图 3E)分析了 GSDMD-FL 和 ...
ROS能够促进GSDMD细胞焦亡发生,研究人员使用ROS激活剂和抑制剂进行了细胞实验,发现细胞内ROS能够促进GSDMD-NT和GSDMD-FL的棕榈酰化,并且GSDMD的棕榈酰化又能进一步破坏线粒体增加ROS生成,二者以相互促进的方式促进细胞焦亡发生。 图2 线粒体产生ROS增强GSDMD棕榈酰化 ...
通过定义每个细胞在首次检测到染料摄取 (质膜损伤) 时的时间为 0 来同步焦亡变化:在 DOX 后,最终经 PI 或 SYTOX 摄取评估死亡的 GSDMD-NT-BFP 表达细胞中,MitoTracker 和 TMRM 强度都降低了(图 3A 和 3B),而在表达 FL-GSDMD-BFP 的细胞中,线粒体染料强度和 PI 摄取保持不变 (图 S2C-2F)。GSDMD-NT-...
结果表明,五株单抗均能够特异性识别猪gsdmd全长蛋白(gsdmd-fl),其中15h6、19h3、23h10、27a10能进一步识别猪gsdmd蛋白被活化切割后具有膜成孔活性的gsdmd氨基端片段(gsdmd-nt),25e2识别猪gsdmd蛋白的羧基端片段(gsdmd-ct);具体而言,15h6识别猪gsdmd蛋白的28–34aa,氨基酸序列为lqtsdrf;19h3识别猪gsdmd蛋白的257...
同时,参与细胞焦亡的关键蛋白GSDMD的全长GSDMD-FL和N端结构域GSDMD-N均呈现与损伤模型时间正相关的增加趋势。进一步通过特异性敲除心肌细胞内GSDMD基因,发现可明显阻断心肌细胞焦亡的发生,证实GSDMD蛋白在缺血再灌注诱导的心肌细胞焦亡中发挥关键...
通过在心肌细胞内高表达GSDMD-FL、GSDMD-N、GSDMD-C,发现只有GSDMD N端结构域促进细胞焦亡,同时证实GSDMD有效结构域的剪切释放依赖于天冬氨酸蛋白水解酶11(caspase-11)(图1)。氧化应激是心肌缺血再灌注损伤的重要病理机制之一,故利用H2O2模拟体内外氧化应激刺激,发现H2O2可明显引起心肌细胞焦亡及GSDMD-N的激活。体...
摘要:本发明公开了抗猪GSDMD蛋白单克隆抗体及其应用。本发明提供了五株小鼠抗猪GSDMD蛋白的单抗,并建立了利用所述单抗对猪GSDMD蛋白进行免疫印迹和免疫荧光检测的方法。结果表明,五株单抗均能够特异性识别猪GSDMD全长蛋白GSDMD‑FL,其中15H6、19H3、23H10、27A10能进一步识别猪GSDMD蛋白被活化切割后所形成的具有膜成...